M13噬菌體的原理、技術(shù)流程及應(yīng)用領(lǐng)域
常見的噬菌體種類
M13噬菌體的結(jié)構(gòu)示意圖
噬菌展示技術(shù)介紹
歷史背景
該技術(shù)由George Smith于1985年首創(chuàng)，因其在定向分子進化中的貢獻，Smith與Gregory Winter共同獲得2018年諾貝爾化學(xué)獎。M13因其溫和特性（不裂解宿主）成為最常用的展示載體之一。
基本原理
M13噬菌體是一種感染大腸桿菌的絲狀噬菌體，其基因組為單鏈DNA。展示技術(shù)的核心是通過基因工程將外源蛋白基因與噬菌體衣殼蛋白（如pIII或pVIII）基因融合，使外源蛋白在噬菌體表面表達。
pIII蛋白：位于噬菌體末端，通常展示單拷貝的大分子蛋白（如抗體片段）。
pVIII蛋白：構(gòu)成噬菌體主要衣殼，適合展示多拷貝的小肽（如10-20個氨基酸）。
技術(shù)流程
1.基因克隆：將目標(biāo)蛋白或肽的編碼基因克隆到M13噬菌體的基因組中，通常是插入到編碼噬菌體外殼蛋白的基因中。
2.噬菌體文庫構(gòu)建：轉(zhuǎn)化改造后的M13噬菌體到大腸桿菌中，感染細菌后，噬菌體會在細菌內(nèi)復(fù)制并合成外殼蛋白，同時將目標(biāo)蛋白或肽展示在噬菌體表面。
3.親和篩選（Panning）：將噬菌體與固定化的靶分子（如抗原）孵育。洗去未結(jié)合的噬菌體，保留特異性結(jié)合的噬菌體。
4.擴增與富集：回收結(jié)合的噬菌體，感染大腸桿菌擴增，重復(fù)篩選3-4輪以提高結(jié)合力。
5.鑒定：通過測序或功能實驗分析篩選出的噬菌體攜帶的外源基因。
The general process of biopanning
核心優(yōu)勢
直接基因關(guān)聯(lián)：噬菌體攜帶外源蛋白的編碼基因，便于后續(xù)克隆。
高通量篩選：可快速篩選數(shù)百萬至數(shù)十億個分子。
無需蛋白純化：展示的蛋白直接用于結(jié)合實驗。
應(yīng)用領(lǐng)域
抗體篩選：M13噬菌體展示技術(shù)最廣泛的應(yīng)用之一就是單克隆抗體的篩選。通過展示不同抗體片段（如重鏈或輕鏈的可變區(qū)），可以快速篩選出與特定抗原結(jié)合的抗體。這些抗體可以用于疾病診斷、治療等領(lǐng)域。
疫苗開發(fā)：可以利用噬菌體展示技術(shù)展示病原體的表面抗原，通過篩選獲得與病原物質(zhì)相互作用的抗原肽，這為疫苗的設(shè)計提供了線索。
藥物篩選：該技術(shù)還可用于小分子藥物的篩選，尤其是在尋找靶標(biāo)分子或蛋白質(zhì)相互作用方面。例如，通過展示小肽，可以篩選出具有特定生物活性的分子。
蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究：利用噬菌體展示技術(shù)，可以探究不同蛋白質(zhì)之間的相互作用。例如，通過展示一個蛋白的特定片段，尋找能夠結(jié)合該片段的其他蛋白質(zhì)。
新型酶的開發(fā)：通過展示酶活性位點的特定肽，可以篩選出具有所需酶活性的突變體或全新酶。
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部分數(shù)據(jù)展示
M13 phage Recombinant Rabbit mAb (Biotin Conjugate) (S-1403-13) （貨號：S0B1686）
Indirect ELISA binding analysis of M13 phage Recombinant Rabbit mAb (Biotin Conjugate) (S-1403-13)
Coating: M13 phage, 1*10E7 pfu/ml
Primary antibody: M13 phage (Biotin Conjugate) (S-1403-13), from 1μg/ml, 3-fold diluent, 7 points
M13 OneStep ELISA Kit（貨號：S0C3033）
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