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自噬（Autophagy），或稱自體吞噬，是一個涉及到細(xì)胞自身結(jié)構(gòu)通過溶酶體機(jī)制而被分解的過程，該過程是一個受到緊密調(diào)控的步驟，幫助細(xì)胞產(chǎn)物在合成、降解以及接下來的循環(huán)中保持一個平衡狀態(tài)。
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一、介紹
自噬（Autophagy），或稱自體吞噬，是一個涉及到細(xì)胞自身結(jié)構(gòu)通過溶酶體機(jī)制而被分解的過程，該過程是一個受到緊密調(diào)控的步驟，幫助細(xì)胞產(chǎn)物在合成、降解以及接下來的循環(huán)中保持一個平衡狀態(tài)。細(xì)胞接受自噬誘導(dǎo)信號后，在胞漿的某處形成一個扁平的類似“脂質(zhì)體”樣的膜結(jié)構(gòu)，稱為Phagophore。隨著Phagophore不斷延伸，將胞漿中的細(xì)胞器等成分，全部包裹住成為密閉的結(jié)構(gòu)，稱為“自噬體（autophagosome）”。自噬體形成后，可與溶酶體融合，自噬體中的內(nèi)容物隨即被降解，產(chǎn)物（氨基酸、脂肪酸等）被輸送到胞漿中，供細(xì)胞重新利用，而殘渣或被排出細(xì)胞外或滯留在胞漿中。
二、研究策略和方法
正常細(xì)胞基礎(chǔ)水平自噬活性比較低，對自噬研究通常需要進(jìn)行人工調(diào)節(jié)和干預(yù)，常用藥物有：
1、自噬誘導(dǎo)劑
a) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin ：模擬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激；
b) Carbamazepine/ L-690，330/ Lithium Chloride（氯化鋰）：IMPase 抑制劑（即Inositol monophosphatase，肌醇單磷酸酶）；
c) Earle's平衡鹽溶液：制造饑餓；
d) N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：Class I PI3K Pathway抑制劑；
e) Rapamycin：mTOR抑制劑；
f) Xestospongin B/C：IP3R阻滯劑。
2、自噬抑制劑
a) 自噬抑制劑3-Methyladenine（3-MA）：(Class III PI3K) hVps34 抑制劑；
b) Bafilomycin A1：質(zhì)子泵抑制劑；
c) 溶酶體抑制劑Hydroxychloroquine（羥氯喹）。
3、自噬檢測
1) 透射電鏡；
電鏡作為自噬檢測的金指標(biāo)。由于自噬體屬于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，普通光鏡下觀察不到自噬體的形成，因此，直接觀察自噬體需在透射電鏡下。Phagophore的特征為：新月狀或杯狀，雙層或多層膜，有包繞胞漿成分的趨勢。自噬體（AV1）的特征為：雙層或多層膜的液泡狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)含胞漿成分，如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體等。自噬溶酶體（AV2）的特征為：單層膜，胞漿成分已降解。
2) WB檢測標(biāo)志物LC3/Atg8、p62/SQSTM1、Lamps、Atg5、Atg14和Beclin-1；
a）利用Western Blot檢測LC3-II/I比值的變化以評價自噬形成。自噬形成時，胞漿型LC3（即LC3-I）會酶解掉一小段多肽，轉(zhuǎn)變?yōu)椋ㄗ允审w）膜型（即LC3-II），因此，LC3-II/I比值的大小可估計自噬水平的高低。
b）利用Western Blot檢測p62蛋白來評價自噬以及自噬流的強(qiáng)弱：p62蛋白水平的多少與自噬流的強(qiáng)弱有著反比例關(guān)系。
3) 組織蛋白酶Cathepsin活力檢測；
4) IF檢測自噬潮autophagic flux。
三、研究常規(guī)思路
通常情況下，除了研究自噬現(xiàn)象本身，大家更多的是將自噬與各種生命活動或者疾病結(jié)合起來，把自噬作為這些方向的一個機(jī)制來研究。比如研究自噬如何參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、如何參與腫瘤的耐藥性與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、如何參與腫瘤免疫治療的效果、如何參與炎癥反應(yīng)、如何參與氧化應(yīng)激，如何參與自閉癥、阿爾茲海默癥的發(fā)生與治療等，通常的研究模式：
1）證明自噬參與了相關(guān)研究表型（電鏡、LC3II/I-WB、LC3亞細(xì)胞定位、LC3熒光示蹤監(jiān)測自噬流等）
2）證明自噬在表型中起到關(guān)鍵作用（通過自噬抑制劑、激動劑進(jìn)行關(guān)聯(lián)研究）
3）找到表型與自噬橋梁分子（檢測pI3K通路、Beclin-1、ATG家族各成員）
4）在基因?qū)用嫱ㄟ^gain of/lost of function研究橋梁分子在自噬中的作用。
研載生物可以為客戶提供從自噬領(lǐng)域的課題設(shè)計到實驗操作包括后續(xù)實驗結(jié)果的整理等服務(wù)。
研載生物提供自噬單項實驗服務(wù)：
（1）GFP-LC3單熒光自噬指示病毒：GFP-LC3病毒系統(tǒng)可高效感染目的細(xì)胞，表達(dá)GFP-LC3，感染感染后細(xì)胞可在熒光顯微鏡下實時觀察自噬的整體水平；慢病毒滴度≥1x108TU/ml。
（2） mRFP-GFP-LC3雙熒光自噬指示病毒：慢病毒滴度≥1x108 TU/ml。
（3）透射電鏡檢測自噬體。
（4）WB檢測自噬相關(guān)蛋白指標(biāo)。
（5）LC3病毒感染服務(wù)：病毒感染、共聚焦拍照。
【歡迎來電/郵件咨詢】
聯(lián)系人：劉經(jīng)理
電話：021-54376058
手機(jī)：13917998048 (7:00-24:00, 周末節(jié)假日不休)
郵箱：yanzaibio@yihaowan.cn, yanzaibio@163.com
官網(wǎng)：www.yihaowan.com.cn
地址： 上海市閔行區(qū)放鶴路1088號博濟(jì)科技園6號樓109室
自噬（Autophagy），或稱自體吞噬，是一個涉及到細(xì)胞自身結(jié)構(gòu)通過溶酶體機(jī)制而被分解的過程，該過程是一個受到緊密調(diào)控的步驟，幫助細(xì)胞產(chǎn)物在合成、降解以及接下來的循環(huán)中保持一個平衡狀態(tài)。細(xì)胞接受自噬誘導(dǎo)信號后，在胞漿的某處形成一個扁平的類似“脂質(zhì)體”樣的膜結(jié)構(gòu)，稱為Phagophore。隨著Phagophore不斷延伸，將胞漿中的細(xì)胞器等成分，全部包裹住成為密閉的結(jié)構(gòu)，稱為“自噬體（autophagosome）”。自噬體形成后，可與溶酶體融合，自噬體中的內(nèi)容物隨即被降解，產(chǎn)物（氨基酸、脂肪酸等）被輸送到胞漿中，供細(xì)胞重新利用，而殘渣或被排出細(xì)胞外或滯留在胞漿中。
二、研究策略和方法
正常細(xì)胞基礎(chǔ)水平自噬活性比較低，對自噬研究通常需要進(jìn)行人工調(diào)節(jié)和干預(yù)，常用藥物有：
1、自噬誘導(dǎo)劑
a) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin ：模擬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激；
b) Carbamazepine/ L-690，330/ Lithium Chloride（氯化鋰）：IMPase 抑制劑（即Inositol monophosphatase，肌醇單磷酸酶）；
c) Earle's平衡鹽溶液：制造饑餓；
d) N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：Class I PI3K Pathway抑制劑；
e) Rapamycin：mTOR抑制劑；
f) Xestospongin B/C：IP3R阻滯劑。
2、自噬抑制劑
a) 自噬抑制劑3-Methyladenine（3-MA）：(Class III PI3K) hVps34 抑制劑；
b) Bafilomycin A1：質(zhì)子泵抑制劑；
c) 溶酶體抑制劑Hydroxychloroquine（羥氯喹）。
3、自噬檢測
1) 透射電鏡；
電鏡作為自噬檢測的金指標(biāo)。由于自噬體屬于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，普通光鏡下觀察不到自噬體的形成，因此，直接觀察自噬體需在透射電鏡下。Phagophore的特征為：新月狀或杯狀，雙層或多層膜，有包繞胞漿成分的趨勢。自噬體（AV1）的特征為：雙層或多層膜的液泡狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)含胞漿成分，如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體等。自噬溶酶體（AV2）的特征為：單層膜，胞漿成分已降解。
2) WB檢測標(biāo)志物LC3/Atg8、p62/SQSTM1、Lamps、Atg5、Atg14和Beclin-1；
a）利用Western Blot檢測LC3-II/I比值的變化以評價自噬形成。自噬形成時，胞漿型LC3（即LC3-I）會酶解掉一小段多肽，轉(zhuǎn)變?yōu)椋ㄗ允审w）膜型（即LC3-II），因此，LC3-II/I比值的大小可估計自噬水平的高低。
b）利用Western Blot檢測p62蛋白來評價自噬以及自噬流的強(qiáng)弱：p62蛋白水平的多少與自噬流的強(qiáng)弱有著反比例關(guān)系。
3) 組織蛋白酶Cathepsin活力檢測；
4) IF檢測自噬潮autophagic flux。
三、研究常規(guī)思路
通常情況下，除了研究自噬現(xiàn)象本身，大家更多的是將自噬與各種生命活動或者疾病結(jié)合起來，把自噬作為這些方向的一個機(jī)制來研究。比如研究自噬如何參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、如何參與腫瘤的耐藥性與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、如何參與腫瘤免疫治療的效果、如何參與炎癥反應(yīng)、如何參與氧化應(yīng)激，如何參與自閉癥、阿爾茲海默癥的發(fā)生與治療等，通常的研究模式：
1）證明自噬參與了相關(guān)研究表型（電鏡、LC3II/I-WB、LC3亞細(xì)胞定位、LC3熒光示蹤監(jiān)測自噬流等）
2）證明自噬在表型中起到關(guān)鍵作用（通過自噬抑制劑、激動劑進(jìn)行關(guān)聯(lián)研究）
3）找到表型與自噬橋梁分子（檢測pI3K通路、Beclin-1、ATG家族各成員）
4）在基因?qū)用嫱ㄟ^gain of/lost of function研究橋梁分子在自噬中的作用。
研載生物可以為客戶提供從自噬領(lǐng)域的課題設(shè)計到實驗操作包括后續(xù)實驗結(jié)果的整理等服務(wù)。
研載生物提供自噬單項實驗服務(wù)：
（1）GFP-LC3單熒光自噬指示病毒：GFP-LC3病毒系統(tǒng)可高效感染目的細(xì)胞，表達(dá)GFP-LC3，感染感染后細(xì)胞可在熒光顯微鏡下實時觀察自噬的整體水平；慢病毒滴度≥1x108TU/ml。
（2） mRFP-GFP-LC3雙熒光自噬指示病毒：慢病毒滴度≥1x108 TU/ml。
（3）透射電鏡檢測自噬體。
（4）WB檢測自噬相關(guān)蛋白指標(biāo)。
（5）LC3病毒感染服務(wù)：病毒感染、共聚焦拍照。
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電話：021-54376058
手機(jī)：13917998048 (7:00-24:00, 周末節(jié)假日不休)
郵箱：yanzaibio@yihaowan.cn, yanzaibio@163.com
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手機(jī)版：細(xì)胞自噬
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