外泌體RNA數(shù)字PCR服務(wù)

       微滴式數(shù)字PCR（Droplet digital PCR），又稱為“油包水PCR”或“ddPCR”。在傳統(tǒng)的PCR擴(kuò)增前對(duì)樣品進(jìn)行微滴化處理，即將含有核酸分子的反應(yīng)體系分成成千上萬個(gè)納升級(jí)的微滴，其中每個(gè)微滴含有一個(gè)至數(shù)個(gè)待檢核酸靶分子。經(jīng)PCR擴(kuò)增后，逐個(gè)對(duì)每個(gè)微滴進(jìn)行檢測，有熒光信號(hào)的微滴判讀為1，沒有熒光信號(hào)的微滴判讀為0，根據(jù)泊松分布原理及陽性微滴的個(gè)數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不僅有效提高了核酸分子的擴(kuò)增效率，而且由于采用微滴計(jì)數(shù)的方法進(jìn)行定量，從根本上突破了基于熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量的技術(shù)限制，并可對(duì)所測樣品中的核酸分子進(jìn)行絕對(duì)定量。數(shù)字PCR的檢測靈敏度相比普通RT-PCR提高了10-100倍，樣本用量也減少了10倍以上。

|   華盈生物數(shù)字PCR服務(wù)

       基于數(shù)字PCR在靈敏度上的絕對(duì)優(yōu)勢，在外泌體RNA這種ng級(jí)微量樣品的檢測和驗(yàn)證時(shí)尤為適用。當(dāng)外泌體RNA量較少時(shí)，數(shù)字PCR可以在0.1ng的基礎(chǔ)上進(jìn)行穩(wěn)定檢測，而普通RT-PCR的檢測起始量一般在1ng左右，很難完成多個(gè)基因的檢測工作。華盈生物將數(shù)字PCR納入到外泌體RNAs（miRNA、mRNA、lncRNA和circRNA）測序驗(yàn)證和獨(dú)立檢測實(shí)驗(yàn)中，并建立了嚴(yán)謹(jǐn)可靠的技術(shù)路線，為獲得可靠的數(shù)字PCR數(shù)據(jù)提供了保障，具體服務(wù)流程如下：

|    經(jīng)典案例：發(fā)現(xiàn)外泌體miRNA標(biāo)志物：SmallRNA測序+數(shù)字PCR

       在56例血漿外泌體中通過Small RNA測序技術(shù)篩選，研究人員發(fā)現(xiàn)6種miRNA在子宮內(nèi)膜癌與健康對(duì)照間存在顯著差異。該6種miRNA形成的組合對(duì)于子宮內(nèi)膜癌的診斷效能AUC達(dá)到0.983。進(jìn)一步通過與TCGA數(shù)據(jù)庫比對(duì)，發(fā)現(xiàn)這6種miRNA在腫瘤組織中的表達(dá)趨勢與血漿外泌體一致。

       為節(jié)約樣本，研究人員采用了靈敏度更高的微滴數(shù)字PCR技術(shù)，對(duì)202例獨(dú)立血漿樣本進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果顯示3種miRNA可以完全驗(yàn)證測序結(jié)果。將這3種miRNA與傳統(tǒng)標(biāo)志物TB形成組合，能夠?qū)⒆訉m內(nèi)膜癌的診斷效能AUC提高到0.904。并且對(duì)于早期（Stage I ）的子宮內(nèi)膜癌的診斷效能AUC可達(dá)到0.915。

|   相關(guān)文獻(xiàn)

[1]. Lanyun Zhou, Wei Wang, Fenfen Wang, et al. Plasma-derived exosomal miR-15a-5p as a promising diagnostic biomarker for early detection of endometrial carcinoma. Mol Cancer. 2021 Mar 29;20(1):57. IF=27.401

[2]. Shi-Ji Li, Zhi-Wen Cai, Hong-Fu Yang, et al. A Next-Generation Sequencing of Plasma Exosome-Derived microRNAs and Target Gene Analysis with a Microarray Database of Thermally Injured Skins: Identification of Blood-to-Tissue Interactions at Early Burn Stage. J Inflamm Res. 2021:14 6783–6798. IF=6.922

[3]. Zhiwu Dong, Hongjun Gu, Qiang Guo，et al. Profiling of Serum Exosome MiRNA Reveals the Potential of a MiRNA Panel as Diagnostic Biomarker for Alzheimer's Disease. Mol Neurobiol. 2021 Jul;58(7):3084-3094. IF=5.590