外泌體示蹤服務(wù)

       對(duì)于外泌體功能研究，一般先要觀察到外泌體被受體細(xì)胞攝取或到達(dá)目的組織和器官后，再檢測(cè)受體細(xì)胞、組織或器官中相應(yīng)表型指標(biāo)是否發(fā)生變化。因此，外泌體標(biāo)記和示蹤是外泌體功能研究的基礎(chǔ)和關(guān)鍵步驟。華盈生物擁有完整的技術(shù)平臺(tái)和豐富的服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，可以提供各種外泌體/凋亡小體的標(biāo)記、體外細(xì)胞吞噬/熒光共聚焦和體內(nèi)小動(dòng)物成像等外泌體示蹤服務(wù)。

       目前已發(fā)表的外泌體文章中，外泌體大多使用親脂性染料進(jìn)行標(biāo)記，染料原理是親脂性熒光膜染料將脂肪族的長尾巴插入外泌體的脂質(zhì)雙層中后發(fā)出穩(wěn)定且持久的強(qiáng)熒光信號(hào)（以非共價(jià)方式嵌入），有助于觀察外泌體與受體細(xì)胞/組織/器官之間的相互作用，在體內(nèi)和體外都有較多應(yīng)用。

       常用的親脂性染料主要分為兩大類，第一類是PKH67（綠色熒光）/PKH26（紅色熒光），第二類是Di系列的親脂性染料，如DiL（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光）。這些染料可以穩(wěn)定的與外泌體的膜脂質(zhì)區(qū)結(jié)合并發(fā)出熒光，可以用于外泌體的功能學(xué)研究。

1. 親脂性染料:PKH-67（綠色熒光）/PKH-26（紅色熒光）

      PKH系列染料具有毒性較小，熒光背景低，脂溶性高，能夠穿透細(xì)胞膜，熒光強(qiáng)而穩(wěn)定等特點(diǎn)。其中PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天，相比于PKH-67，PKH-26具有更長的半衰期，由于其熒光穩(wěn)定性較強(qiáng)，在標(biāo)記研究周期超過一周時(shí)，特別適用于外泌體示蹤研究。

2. 親脂性羰花青染料

       DiL,DiR,DiO,DiD是一系列親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。這些環(huán)境敏感性熒光染料在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，其具有消光系數(shù)高、極性依賴性、激發(fā)態(tài)壽命短等特點(diǎn)。如DiR 是一種親脂性近紅外熒光膜染料，可穿透細(xì)胞和組織，在活體成像中用來示蹤。通過兩個(gè)18-碳鏈插入到脂膜，在水中微弱熒光，當(dāng)摻入膜中時(shí)具有高熒光和相當(dāng)好的光穩(wěn)定性，實(shí)現(xiàn)特異性、穩(wěn)定的膜染色。此外，近紅外熒光成像的背景干凈，可以避免生物體內(nèi)在可見光范圍內(nèi)自發(fā)熒光造成的背景干擾。

|   外泌體示蹤產(chǎn)品

|   外泌體示蹤流程      

|   相關(guān)文獻(xiàn)

[1]. Chen L, Wang Y, Li S, et al. Exosomes Derived from GDNF-Modified Human Adipose Mesenchymal Stem Cells Ameliorate Peritubular Capillary Loss in Tubulointerstitial Fibrosis by Activating the SIRT1/eNOS Signaling Pathway. Theranostics. 2020 Jul 25;10(20):9425-9442.

[2]. Ren R, Sun H, Ma C, et al. Colon cancer cells secrete exosomes to promote self-proliferation by shortening mitosis duration and activation of STAT3 in a hypoxic environment. Cell Biosci. 2019 Aug 6;9:62.

[3]. Yoshida K, Tsuda M, Matsumoto R, et al. Exosomes containing ErbB2/CRK induce vascular growth in premetastatic niches and promote metastasis of bladder cancer. Cancer Sci. 2019 Jul;110(7):2119-2132.

[4]. Liu Hao,Marquez Rebecca T,Wu Xiaoqing et al. A non-intrusive evaluation method for tumor-targeting characteristics of nanomedicines based on in vivo near-infrared fluorescence imaging. J Mater Chem B, 2019, 7: 4751-4757.

[5]. Tang Yixuan,Wang Xiaoyou,Li Jie et al. Overcoming the Reticuloendothelial System Barrier to Drug Delivery with a "Don't-Eat-Us" Strategy. ACS Nano, 2019, 13: 13015-13026.

[6]. Wiklander O P B, Nordin J Z, O"Loughlin A, et al. Extracellular vesicle in vivo biodistribution is determined by cell source, route of administration and targeting. J Extracell Vesicles. 2015 Apr 20;4:26316.