實驗簡介
蛋白免疫印跡(Western Blot)是將電泳分離后的細胞或組織中蛋白質從凝膠轉移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質檢測技術,現(xiàn)已廣泛應用于基因在蛋白水平的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面。
采用的聚丙烯酰胺凝膠電泳將蛋白質分離,轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變,以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,通過是抗體特異性結合到目的抗原上,再將可以“顯色”二抗與一抗結合,經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。
實驗方法
(1)蛋白提取;
(2)蛋白定量檢測和變性;
(2)SDS-PAGE電泳;
(3)轉膜;
(4)封閉
(5)一抗/二抗抗體孵育;
(6)底物顯色;
(7)灰度值分析,統(tǒng)計學分析。
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