Co-IP檢測(cè)

Co-IP檢測(cè)：細(xì)胞培養(yǎng)與處理，免疫共沉淀，Western Blot檢測(cè)
免疫共沉淀（Co-IP）是利用抗原與抗體之間的專一性作用為基礎(chǔ)，用于研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用的經(jīng)典方法。

服務(wù)類別：	分子與細(xì)胞	總訪問(wèn)：	242
最后更新：	2022-11-16	半年訪問(wèn)：	29
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實(shí)驗(yàn)原理
當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用被保留了下來(lái)，假如細(xì)胞內(nèi)存在XY蛋白復(fù)合物，用X（X也稱為誘餌蛋白）的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y（Y也稱為靶蛋白）也被沉淀下來(lái)。因此在細(xì)胞裂解液中加入X的抗體沉淀蛋白X，隨后利用蛋白印跡（western blot，WB）檢測(cè)沉淀中是否存在蛋白Y，如果存在，則說(shuō)明細(xì)胞內(nèi)存在XY蛋白復(fù)合物，即蛋白XY存在相互作用。
收集蛋白樣品蛋白樣品通常通過(guò)裂解細(xì)胞得到。Co-IP實(shí)驗(yàn)通常有兩種，一種為內(nèi)源性蛋白相互作用驗(yàn)證，另外一種為非內(nèi)源性蛋白相互作用驗(yàn)證，內(nèi)源性相互作用是指兩蛋白相互作用在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生，即通過(guò)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的方式將兩種蛋白轉(zhuǎn)染至同一細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，表達(dá)完成后收集細(xì)胞進(jìn)行裂解得到蛋白樣品。非內(nèi)源性相互作用兩蛋白相互作用在細(xì)胞外發(fā)生，即將含有靶蛋白的動(dòng)植物組織、器官進(jìn)行預(yù)處理及細(xì)胞裂解獲得細(xì)胞裂解液，隨后將誘餌蛋白（通常為重組表達(dá)純化獲得）加入細(xì)胞裂解液中，得到蛋白樣品。

沉淀誘餌蛋白利用磁珠偶聯(lián)抗體沉淀誘餌蛋白：在樣品中加入磁珠偶聯(lián)抗體，抗體會(huì)與誘餌蛋白結(jié)合，利用磁鐵將磁珠拉下，同時(shí)誘餌蛋白會(huì)一起被沉淀出來(lái)。如果存在與誘餌蛋白的相互作用的靶蛋白，也會(huì)被沉淀下來(lái)。如果沒(méi)有誘餌蛋白的特異性抗體，可以給誘餌蛋白加上標(biāo)簽（Myc、HA、Flag等），然后利用標(biāo)簽抗體沉淀蛋白。

SDS-PAGE及WB檢測(cè)得到沉淀后，需要驗(yàn)證沉淀中是否存在相互作用蛋白。先利用SDS-PAGE將蛋白復(fù)合物分離，隨后利用WB檢測(cè)是否存在靶蛋白（如果靶蛋白的分子量是已知的，可以直接用SDS-PAGE檢測(cè)是否存在靶蛋白）。
上述所有實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果皆為真實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)周期短，效率高，服務(wù)質(zhì)量高，感興趣聯(lián)系15511958250 賈先生。

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