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病理技術(shù)平臺(tái)——制片
北京蘭博泰斯生物科技有限公司在制備石蠟切片及冰凍切片方面有豐富的經(jīng)驗(yàn)。
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      制作石蠟切片,切片前須將石蠟滲透組織包埋于石蠟中,而水與石蠟又是不相混合的,所以在浸蠟,包埋前必須將組織內(nèi)所含的水分脫去。而大多數(shù)的組織固定劑是水溶液,隨后的水沖洗也使其含有大量水分,因此必須先行脫水,一般是浸入逐級(jí)增加濃度的酒精來完成。由于酒精和石蠟不能混合,須再用一種石蠟的溶劑來置換酒精,因大多數(shù)石蠟溶劑有使組織的折光率增高并表現(xiàn)為透明或半透明狀,所以此步驟又稱透明。最后用石蠟浸漬組織并鑄制成堅(jiān)實(shí)的蠟塊。常規(guī)的石蠟包埋過程包括五個(gè)基本步驟,即固定,脫水,透明,浸蠟和包埋。
      材料的好壞直接影響到切片的質(zhì)量,無論取哪一種動(dòng)植物材料,必須注意植物材料選擇時(shí)須盡可能不損傷植物體或所需要的部分;動(dòng)物材料取用時(shí)將動(dòng)物殺死后迅速取出所需要的組織。
      冰凍切片(frozen section)是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度,然后進(jìn)行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡(jiǎn)便,而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。冰凍切片的種類較多,有低溫恒冷箱冰凍切片法,二氧化碳冰凍切片法,甲醇循環(huán)制冷冰凍切片法等。

操作方法及步驟:
①取材,未能固定的組織取材,不能太大太厚,厚者冰凍費(fèi)時(shí),大者難以切完整,最好為24×24×2mm。
②取出組織支承器,放平擺好組織,周邊滴上包埋劑,速放于冷凍臺(tái)上,冰凍。小組織的應(yīng)先取一支承器,滴上包埋劑讓其冷凍,形成一個(gè)小臺(tái)后,再放上細(xì)小組織,滴上包埋劑。
③將冷凍好的組織塊,夾緊于切片機(jī)持承器上,啟動(dòng)粗進(jìn)退鍵,轉(zhuǎn)動(dòng)旋鈕,將組織修平。
④調(diào)好欲切的厚度,根據(jù)不同的組織而定,原則上是細(xì)胞密集的薄切,纖維多細(xì)胞稀的可稍為厚切,一般在5~10um間。
⑤調(diào)好防卷板。制作冰凍切片,關(guān)鍵在于防卷板的調(diào)節(jié)上,這就要求操作者要細(xì)心,準(zhǔn)確地將其調(diào)較好,調(diào)校至適當(dāng)?shù)奈恢谩G衅瑫r(shí),切出的切片能在第一時(shí)間順利地通過刀防卷板間的通道,平整地躺在持刀器的鐵板上。這時(shí)便可掀起防卷板,取一載玻片,將其附貼上即可。
⑥應(yīng)視不同的組織選擇不同的冷凍度。冷凍箱中冷凍度的高低,主要根據(jù)不同的組織而定,不能一概而論。如:切未經(jīng)固定的腦組織,肝組織和淋巴結(jié)時(shí),冷凍箱中的溫度不能調(diào)太低,在-10- -15℃左右,切甲狀腺、脾、腎、肌肉等組織時(shí),可調(diào)在-15~20℃左右,切帶脂肪的組織時(shí),應(yīng)調(diào)至-25℃左右,切含大量的脂肪時(shí),應(yīng)調(diào)至-30℃。
冰凍切片時(shí)的注意事項(xiàng):
①防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應(yīng)保持干凈,需經(jīng)常用毛筆挑除切片殘余和用柔軟的紙張擦。有時(shí)需要每切完一張切片后就用紙擦一次。因?yàn)檫@個(gè)地方是切片通過和附貼的地方,如果有殘余的包埋劑粘于刀或板上,將會(huì)破壞甚至撕裂切片,便切片不能完整切出。
②多例多塊組織同時(shí)需做冰凍切片時(shí),可各自放于不同的支承器上,于冷凍臺(tái)上凍起來,然后依據(jù)不同的編號(hào),依序切片,這樣做既不費(fèi)時(shí)也不會(huì)亂。
③放置組織冰凍前,應(yīng)視組織的形狀及走勢(shì)來放置,所謂“砍柴看柴勢(shì)”,切片也是如此,如果胡亂放置,就不能收到很好的效果。
④組織塊不須經(jīng)各種固定液固定,尤其是含水的固定液,在未達(dá)到固定前,更不能使用。臨床快速冰凍切片,不須要預(yù)先固定,一是為了爭(zhēng)取時(shí)間,二是固定了的組織,反而增加了切片的難度。如果使用未完全固定的組織做冰凍切片,就會(huì)出現(xiàn)冰晶。這是因?yàn)楹墓潭ㄒ涸诮M織未經(jīng)固定前,其中的水份也可滲入到組織中去,當(dāng)冰凍發(fā)生時(shí),這些水份就存留于組織中,形成了冰晶。
⑤當(dāng)切片時(shí),如果發(fā)現(xiàn)冰凍過度時(shí),可將冰凍的組織連同支承器取出來,在室溫停留片刻,再行切片,或者用口中哈氣,或者用大拇指按壓組織塊,以此來軟化組織,再行切片。另者,調(diào)高冰凍點(diǎn)。
⑥用于附貼切片的載玻片,不能存放于冷凍處,于室溫存放即可。因?yàn)楫?dāng)附貼切片時(shí),從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差,當(dāng)溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時(shí),由于兩種物質(zhì)間溫度的差別,當(dāng)它們碰撞在一起時(shí),分子彼此間發(fā)生轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生了一種吸附力,使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片,由于溫度相同,沒有發(fā)生上述的現(xiàn)象。
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