細(xì)胞、細(xì)菌敲除技術(shù)服務(wù)

細(xì)胞內(nèi)基因的定點(diǎn)敲除、敲入

2013年 1月份，美國(guó)兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室在《 Science》雜志發(fā)表了基于 CRISPR-Cas9技術(shù)在細(xì)胞系中進(jìn)行基因敲除的新方法，該技術(shù)與以往的技術(shù)不同，是利用靶點(diǎn)特異性的 RNA將 Cas9核酸酶帶到基因組上的具體靶點(diǎn)，從而對(duì)特定基因位點(diǎn)進(jìn)行切割導(dǎo)致突變。具有效率高、速度快、生殖系轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)及簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)。

Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats（CRISPR）是細(xì)菌和古細(xì)菌為應(yīng)對(duì)病毒和質(zhì)粒

不斷攻擊而演化來的獲得性免疫防御機(jī)制，其中 II型 CRISPR/Cas免疫系統(tǒng)依賴 Cas9內(nèi)切酶家族靶向和剪

切外源 DNA。在這一系統(tǒng)中， crRNA（CRISPR-derived RNA）通過堿基配對(duì)與 tracrRNA（trans-activating RNA）

結(jié)合形成雙鏈 RNA，此 tracrRNA/crRNA二元復(fù)合體指導(dǎo) Cas9蛋白在 crRNA引導(dǎo)序列靶定位點(diǎn)剪切雙鏈

DNA，其中 Cas9的 HNH核酸酶結(jié)構(gòu)域剪切互補(bǔ)鏈，其 RuvC-like結(jié)構(gòu)域剪切非互補(bǔ)鏈。具體如下圖所示：

基因敲除（敲入）流程：

                             做實(shí)驗(yàn)，掃一掃