實(shí)時(shí)熒光PCR/實(shí)時(shí)熒光RT-PCR

 概念和原理

    Real-time PCR/real-time RT-PCR是在普通PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線或參比樣本對模板中目的DNA/RNA片段進(jìn)行定量分析的技術(shù)。根據(jù)采用的熒光基團(tuán)的不同，可以初略分為Taqman探針法和SYBR Green染料法。

科研和臨床應(yīng)用

    由于可以從各種樣本中大量擴(kuò)增目的基因片段并進(jìn)行相對或絕對定量，因此，可廣泛應(yīng)用于=感染性疾病病原體（如細(xì)菌、流感病毒、手足口病毒. HIV. HBV. HPV. EBV. CMV. TB.支原體、衣原體等）的檢測與定量分析、腫瘤相關(guān)基因的檢測與研究、藥物對基因表達(dá)水平的影響、與藥物療效監(jiān)控相關(guān)的基因的檢測與研究等各種涉及到基因檢測的領(lǐng)域。

標(biāo)本采集、保存、運(yùn)輸

    全血樣本：用EDTA抗凝管收集2 ml全血，顛倒混勻抗凝管8-10次，-80℃保存，冷凍運(yùn)輸。

    組織樣本：新鮮組織樣本離體后，用預(yù)冷PBS或生理鹽水快速將表面殘留的血跡沖洗干凈，切成黃豆大小，裝入2 0ml EP管或體積更大的旋蓋凍存管中，立即置于液氮中冷凍3-4 h以上，然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中保存，冷凍運(yùn)輸。

    細(xì)胞樣本：離心收集細(xì)胞（≥1×1 06個(gè)），①DNA檢測：液氮速濤，-80℃保存，冷凍運(yùn)輸：②RNA檢測：加入適量（如使用TRIzol，通常為1 ml）細(xì)胞裂解液，反復(fù)吸打數(shù)次，直至看不見成團(tuán)的細(xì)胞塊，使之充分溶解于裂解液中形成清亮不粘稠的液體，-80℃保存，冷凍運(yùn)輸。

客戶須知

客戶需提供：

    新鮮足量的檢測樣本（血液、骨髓、組織、細(xì)胞、咽試紙等）或提取的質(zhì)量合格的足量RNA/DNA。

    需檢測的病原體名稱或基因名稱（中英文全稱）。

報(bào)告形式：

提供擴(kuò)增曲線圖，ct值等。