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WGBS甲基化測(cè)序-表觀遺傳學(xué)研究服務(wù)
DNA甲基化是重要的表觀遺傳學(xué)標(biāo)記信息,我們以新一代高通量測(cè)序平臺(tái)為基礎(chǔ),進(jìn)行低成本、高效率、高準(zhǔn)確度的全基因組DNA甲基化水平圖譜繪制。
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DNA甲基化是重要的表觀遺傳學(xué)標(biāo)記信息,獲得全基因組范圍內(nèi)所有C位點(diǎn)的甲基化水平數(shù)據(jù),對(duì)于表觀遺傳學(xué)的時(shí)空特異性研究具有重要意義。我們以新一代高通量測(cè)序平臺(tái)為基礎(chǔ),進(jìn)行低成本、高效率、高準(zhǔn)確度的全基因組DNA甲基化水平圖譜繪制。特定物種的高精確度甲基化修飾模式的分析,必將在表觀基因組學(xué)研究中具有里程碑式的意義,并為細(xì)胞分化、組織發(fā)育等基礎(chǔ)機(jī)制研究,以及動(dòng)植物育種、人類健康與疾病研究奠定基礎(chǔ)。
 
技術(shù)路線
生物信息學(xué)分析
 
樣品要求
1) 樣品總量:≥ 3ug;   
2) 樣品濃度:≥ 50ng/ul。     
3) 樣品純度:OD值260/280應(yīng)在1.8~2.0;
4) 樣品質(zhì)量:基因組完整、無(wú)降解、無(wú)污染。
5) 樣品包裝:用封口膜密封樣品,DNA低溫運(yùn)輸(-20℃)。
 
應(yīng)用案例
Conservation and divergence of methylation patterning in plants and animals Feng S,Cokus SJ et al.(2010) PNAS
 
背景:
1. 胞嘧啶甲基化是一種存在多種真核生物DNA中的表觀遺傳標(biāo)記,盡管DNA甲基化多在基因沉默中有著保守的作用,但DNA甲基化的水平和模式在不同生物體中存在極大的差異。 
2. 利用全基因組鳥(niǎo)槍法重亞硫酸測(cè)序(WGBS-Seq),對(duì)雄蜜蜂、海鞘、小鼠、斑馬魚(yú)、綠衣藻、粳稻、擬南芥、楊樹(shù)8個(gè)物種比較,利用得到的數(shù)據(jù)分析結(jié)果可以幫助研究者選擇合適的模式生物進(jìn)行研究,還可以證明WGBS-Seq的多功能性。
 
研究方法:
1.從雄蜜蜂、海鞘、小鼠、斑馬魚(yú)、綠衣藻、水稻、擬南芥、楊樹(shù)8個(gè)物種的組織提取DNA。
2.WGBS-Seq測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建。
3.Illumina GA 測(cè)序,分別得到118.4Mb-2.72Gb序列數(shù)據(jù)。
4.生物信息學(xué)分析。
 
結(jié)果分析:
1. 開(kāi)花植物甲基化模式很類似,均檢測(cè)到甲基化的胞嘧啶。而動(dòng)物中基本都是CG甲基化。除CpG島外,脊椎動(dòng)物整個(gè)基因組都存在甲基化,且大多數(shù)生物基因組甲基化都很保守傾向于外顯子,海鞘和蜜蜂中基因是主要的甲基化靶點(diǎn),綠衣藻有特別的甲基化模式,非CG甲基化主要集中在基因的外顯子而不是重復(fù)序列和轉(zhuǎn)座子中。
2. Dnmt1(Mouse, Zebrafish)/ MET1 (Arabidopsis)的輔助因子Uhrf1(Mouse, Zebrafish)/VIM(Arabidopsis)有著保守的功能,維持小鼠、擬南芥和斑馬魚(yú)基因組中轉(zhuǎn)座子和基因的CG甲基化。
 
參考文獻(xiàn)
[1]  Xiang H, Zhu J, Chen Q, et al. Single base-resolution methylome of the silkworm reveals a sparse epigenomic map. Nat Biotechnol 2010;28:516-20. 
[2]  Lister R, Pelizzola M, Dowen RH, et al. Human DNA methylomes at base resolution show widespread epigenomicdifferences.Nature, 2009, 462:315-322.
[3]  Feng S, Cokus SJ, Zhang X, et al.Conservation and divergence of methylation patterning in plants and animals.ProcNatlAcad Sci., 2010, 107:8689–8694.
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