高濃度蛋白檢測(cè)優(yōu)化方法

1. 樣品稀釋需求
高濃度樣品（如純化后的濃縮蛋白）需多次稀釋才能落入標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，操作繁瑣且可能引入稀釋誤差（如移液偏差）。
2. 試劑依賴性
依賴顯色反應(yīng)（如Bradford試劑結(jié)合蛋白），需額外試劑配制和孵育時(shí)間（通常需10-30分鐘），無法即時(shí)檢測(cè)。
3. 干擾因素多
Bradford法對(duì)去垢劑（如Triton X-100）、強(qiáng)酸強(qiáng)堿敏感；
Lowry法易受還原劑（如DTT、β-巰基乙醇）干擾。
4. 樣品消耗量大
需數(shù)十至數(shù)百微升樣品（如Bradford法通常需50-100 μL），對(duì)珍貴微量樣本（如原代細(xì)胞裂解液）不友好。

與傳統(tǒng)方法相比，超微量紫外分光光度法通過以下特點(diǎn)實(shí)現(xiàn)了 “免稀釋”快速檢測(cè)：
1. 直接測(cè)量
基于蛋白質(zhì)中色氨酸（Trp）和酪氨酸（Tyr）在280 nm的固有吸光度，無需添加試劑，直接通過吸光度計(jì)算濃度，省去顯色反應(yīng)步驟。
2. 超微量檢測(cè)能力
僅需1-2 μL樣品，尤其適合微量或珍貴樣本。
通過光程縮短技術(shù)（如將1 cm光程縮短至0.05 mm），直接擴(kuò)大線性檢測(cè)范圍（例如：1 mm光程下A280=2對(duì)應(yīng)10 mg/mL，而0.05 mm光程下可測(cè)至200 mg/mL），避免稀釋需求。
3. 實(shí)時(shí)性與高通量
測(cè)量時(shí)間短（<10秒），可快速評(píng)估多個(gè)樣品。自動(dòng)化檢測(cè)，減少人為操作誤差。
對(duì)于一些抗體生產(chǎn)研發(fā)的用戶，通常蛋白濃度比較高，樣品量比較大，同時(shí)樣品又很珍貴。比如在抗體藥物生產(chǎn)的層析純化階段，需快速測(cè)定多個(gè)洗脫組分的蛋白濃度以優(yōu)化收集窗口。若采用Bradford法，僅樣品稀釋和孵育就可能耗費(fèi)數(shù)十分鐘，顯著拖慢流程。而超微量紫外法（A280）通過直接測(cè)量、秒級(jí)出結(jié)果的特性，可無縫整合到自動(dòng)化純化系統(tǒng)中，實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)反饋與動(dòng)態(tài)調(diào)控，將傳統(tǒng)數(shù)小時(shí)的質(zhì)控環(huán)節(jié)壓縮至幾分鐘內(nèi)完成。
    然而，傳統(tǒng)的超微量紫外分光光度計(jì)測(cè)量蛋白濃度高于100mg/mL時(shí)，誤差就會(huì)偏大。以IgG蛋白為例：

蛋白(IgG)濃度范圍	% 誤差
小于 10 mg/mL	±3%
10 – 45 mg/mL	±5%
45 – 110 mg/mL	±10%
110 – 220 mg/mL	±20%
220 – 400 mg/mL	±50%

當(dāng)濃度大于100mg/ml時(shí)，偏差可能大于20%，通常是不同被接受的。目前很多用戶使用的檢測(cè)方法是用可變光程紫外分光光度計(jì)的方法實(shí)現(xiàn)。如圖：
 
雖然這一方法解決了測(cè)量精度的痛點(diǎn)，然而這種方法還有很多需要優(yōu)化的地方：
A. 每次測(cè)量需要消耗至少200ul的樣品；
B. 且檢測(cè)上限最高只有300mg/ml；
C. 檢測(cè)時(shí)會(huì)消耗大量的耗材，增加長(zhǎng)期使用的檢測(cè)成本；
D. 占用很大的實(shí)驗(yàn)室空間。
有沒有一臺(tái)儀器可以一次性解決這些問題呢？
2025年的春天，我們帶著新面世的超微量紫外高精度旗艦版本（NanoDrop Ultra AP）來到了位于南京市的某知名上市藥企，研發(fā)和質(zhì)檢的老師熱情的接待了我們。并拿出來兩個(gè)樣品（抗體1： 180mg/ml和抗體2： 150mg/ml）
讓我們現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試。測(cè)試結(jié)果如下：  
研發(fā)老師：測(cè)試結(jié)果出人意料，又快又準(zhǔn)，測(cè)三個(gè)樣速度2分鐘，每次只要取2ul的樣品；以前我們要8分鐘，而且樣品量要100ml, 還得清洗器皿，定期換管子，買耗材好麻煩；
質(zhì)檢老師：之前的方法還需要電腦上操作，驗(yàn)證也得在電腦上做，確實(shí)不方便；
研發(fā)老師：這是什么神器，你們?yōu)樯恫辉琰c(diǎn)推出呢？
謝謝老師們的認(rèn)可，這是NanoDrop新品：多功能高精度核酸蛋白測(cè)定儀。
1. 檢測(cè)上限提高至400mg/ml（IgG）
2. 三次重復(fù)測(cè)量時(shí)間僅需2分鐘
3. 每次檢測(cè)僅需2ul樣品
4. 無需任何耗材
5. 占地面積小，僅需572cm²的空間
6. 一機(jī)多用，除了高濃度蛋白檢測(cè)，還擁傳統(tǒng)NanoDrop的全部功能

 
 
更多關(guān)注，請(qǐng)聯(lián)系我們：
芮徠（上海）實(shí)驗(yàn)儀器有限公司