外泌體定量蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

       外泌體（Exosomes）是大小為30-150nm，具有磷脂雙分子層膜結(jié)構(gòu)的微小囊泡。外泌體可攜帶豐富的RNAs、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)等生物活性分子，參與細(xì)胞間的通訊與調(diào)控。從外泌體研究專(zhuān)業(yè)數(shù)據(jù)庫(kù)——ExoCarta和Vesiclepedia中記錄的數(shù)據(jù)可以看出，外泌體攜帶的蛋白質(zhì)的豐富程度尤為突出。外泌體蛋攜帶的蛋白質(zhì)是外泌體標(biāo)志物、外泌體載藥、外泌體分子機(jī)制研究的主要分子抓手。

 

 

      外泌體蛋白質(zhì)也是登錄CNS正刊最多的研究對(duì)象。除此之外，外泌體蛋白尤其是膜蛋白具有非常重要的臨床轉(zhuǎn)化價(jià)值，也是臨床轉(zhuǎn)化研究中的新寵。組織外泌體與血漿外泌體比對(duì)分析也成為發(fā)現(xiàn)新型疾病標(biāo)志物的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方案。

      在外泌體蛋白標(biāo)志物相關(guān)研究中，血漿/血清樣本是主要研究載體。然而，血漿/血清中含有大量的載脂蛋白，如高密度脂蛋白質(zhì)HDL，低密度脂蛋白質(zhì)LDL，極低密度脂蛋白VLDL，乳糜微粒CM等。外泌體與這些脂蛋白質(zhì)在物化性質(zhì)上具有較大的相似性。常規(guī)的外泌體分離方法，如超速離心和沉淀法等都無(wú)法有效去除血漿/血清中的脂蛋白，嚴(yán)重干擾了下游質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的檢出率和可靠性。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)樣本來(lái)之不易，如何盡可能利用更少的樣本獲得更可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，成為外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究科研群體共同面對(duì)的技術(shù)問(wèn)題。

|   外泌體蛋白質(zhì)組服務(wù)

       華盈生物開(kāi)發(fā)了一套完整的外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)服務(wù)體系，針對(duì)不同類(lèi)型的樣本分別采用專(zhuān)屬的外泌體提取方法，如超速離心、尺寸排阻、密度梯度離心等。同時(shí)，對(duì)蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)前處理進(jìn)行了系統(tǒng)性創(chuàng)新優(yōu)化，將樣本用量降低的同時(shí)獲取高質(zhì)量數(shù)據(jù)，如利用0.5mL血漿即可完成外泌體的分離與蛋白質(zhì)組篩選工作。

       在樣本使用量和檢出蛋白數(shù)上，華盈生物的技術(shù)平臺(tái)不斷沖擊外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)的檢測(cè)的上限。例如：在人外泌體血漿蛋白組鑒定歷史記錄已達(dá)到2336種蛋白質(zhì)，并且這個(gè)數(shù)據(jù)記錄每天都可能被再次突破。截止目前，華盈生物已經(jīng)完成超過(guò)30種樣品類(lèi)型的樣品外泌體制備與分析。對(duì)于特殊樣本如：胃液、腦積液、腦脊液、膽汁、微生物培養(yǎng)液、植物培養(yǎng)液等，也累積了豐富的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)，可承接復(fù)雜樣品和項(xiàng)目的研究服務(wù)需求。

       對(duì)于外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究來(lái)說(shuō)，外泌體的純度至關(guān)重要。在組織外泌體等熱點(diǎn)研究領(lǐng)域，華盈生物經(jīng)過(guò)系統(tǒng)的研發(fā)和比對(duì)分析，開(kāi)發(fā)出的組織外泌體分離純化方法可顯著提高外泌體的純度，達(dá)到Top雜志的要求。

        華盈生物擁有質(zhì)譜技術(shù)和抗體芯片兩大平臺(tái)，針對(duì)不同的研究需求，選擇更優(yōu)的技術(shù)。質(zhì)譜技術(shù)對(duì)于鑒定能夠在外泌體中攜帶的新蛋白（尤其是膜蛋白）具有顯著優(yōu)勢(shì)，而抗體芯片則利用抗原抗體反應(yīng)的特異性原理，對(duì)于外泌體中攜帶的分泌型的蛋白的鑒定更加靈敏和準(zhǔn)確（抗體芯片目前可檢測(cè)超過(guò)500種分泌蛋白）。

|   經(jīng)典案例：血漿外泌體S100-A9蛋白激活NF-κB促進(jìn)淋巴瘤復(fù)發(fā)

血漿中的外泌體蛋白既可以當(dāng)作標(biāo)志物，也可以進(jìn)行機(jī)理研究？

       首先，研究人員將慢性淋巴瘤（CLL）患者分為2個(gè)亞組：疾病進(jìn)展期和疾病慢性期。然后利用質(zhì)譜技術(shù)分析了患者血漿外泌體蛋白質(zhì)組，發(fā)現(xiàn)S100-A9蛋白在進(jìn)展期CLL患者中明顯高表達(dá)，可以作為CLL進(jìn)展期診斷的輔助標(biāo)志物。進(jìn)一步，研究人員通過(guò)生信分析發(fā)現(xiàn)進(jìn)展期CLL患者外泌體中的高表達(dá)蛋白質(zhì)主要與炎癥和氧化應(yīng)激有關(guān)，而NF-κB通路正是承接此效應(yīng)的關(guān)鍵通路。通過(guò)從進(jìn)展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細(xì)胞中，證實(shí)了S100-A9+外泌體能夠明顯促進(jìn)進(jìn)展期CLL患者PBMC細(xì)胞中IκBα蛋白的磷酸化上調(diào)，進(jìn)一步激活NF-κB通路。

      該研究證通過(guò)血漿外泌體蛋白組分析不僅找到輔助診斷進(jìn)展期CLL的標(biāo)志物，并證實(shí)了S100-A9+外泌體可通過(guò)形成正向反饋調(diào)控，不斷激活進(jìn)展期CLL患者自身PBMC細(xì)胞中的NF-κB通路，促進(jìn)CLL進(jìn)展的特殊機(jī)理。

|   客戶(hù)文獻(xiàn)

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