除菌過濾驗證

1. 除菌過濾驗證

1.1 除菌過濾驗證概述
除菌過濾驗證包含除菌過濾器本身的性能確認和過濾工藝驗證兩部分。除菌過濾器性能確認和過濾工藝驗證，兩者很難互相替代，應(yīng)獨立完成。
除菌過濾器本身的性能確認一般由過濾器生產(chǎn)商完成，主要的確認項目包括微生物截留測試、完整性測試、生物安全測試（毒性測試和內(nèi)毒素測試）、流速測試、水壓測試、多次滅菌測試、可提取物測試、顆粒物釋放測試和纖維脫落測試等。
過濾工藝驗證是指針對具體的待過濾介質(zhì)，結(jié)合特定的工藝條件而實施的驗證過程，一般包括細菌截留試驗、化學(xué)兼容性試驗、可提取物或浸出物試驗、安全性評估和吸附評估等內(nèi)容。如果過濾后，以產(chǎn)品作為潤濕介質(zhì)進行完整性測試，還應(yīng)進行相關(guān)的產(chǎn)品完整性測試驗證。除菌過濾工藝驗證可以由過濾器的使用者或委托試驗檢測機構(gòu)（例如：過濾器的生產(chǎn)者或第三方試驗室）完成，但過濾器使用者應(yīng)最終保證實際生產(chǎn)過程中操作參數(shù)和允許的極值在驗證時已被覆蓋，并有相應(yīng)證明文件。
不同過濾器生產(chǎn)商的驗證文件一般是不能相互替代的，同一生產(chǎn)商的同一材質(zhì)的除菌過濾驗證文件往往也不能直接互換，除非有合理的聲明或文件支持。如果在生產(chǎn)過程中有兩個或以上不同生產(chǎn)商提供同一材質(zhì)或者不同材質(zhì)的過濾器，或同一生產(chǎn)商的同一材質(zhì)（不同的成膜工藝）的過濾器，驗證應(yīng)該分別進行。

1.2 細菌截留試驗
細菌截留試驗的研究目的是模擬實際生產(chǎn)過濾工藝中的最差條件，過濾含有一定量挑戰(zhàn)微生物的產(chǎn)品溶液或者產(chǎn)品替代溶液，以確認除菌過濾器的微生物截留能力。
缺陷型假單胞菌（直徑大約為0.3—0.4微米，長度0.6—1.0微米，必須是單一的、分散的細胞），是除菌過濾驗證中細菌截留試驗的標(biāo)準(zhǔn)挑戰(zhàn)微生物。在有些情況下，缺陷型假單胞菌不能代表最差條件，則需要考慮采用其他細菌。如果使用其他細菌，應(yīng)保證該細菌足夠細小，以挑戰(zhàn)除菌級過濾器的截留性能，并能代表產(chǎn)品及生產(chǎn)過程中發(fā)現(xiàn)的最小微生物。
在除菌過濾驗證中使用濾膜還是濾器，取決于驗證的目的。如果微生物截留試驗的目的是驗證過濾工藝中特定膜材的細菌截留效能，那么使用濾膜是能滿足需要的。微生物截留試驗中所用的濾膜必須和實際生產(chǎn)中所用過濾器材質(zhì)完全相同，并應(yīng)包括多個批次（通常三個批次）。其中至少應(yīng)有一個批次為低起泡點（低規(guī)格）濾膜。為了在微生物挑戰(zhàn)試驗中實施最差條件，一般需要使用完整性測試的數(shù)值非常接近過濾器生產(chǎn)商提供的濾器完整性限值的濾膜（例如不高于標(biāo)準(zhǔn)完整性限值的110%）。如果在驗證中沒有使用低起泡點濾膜，那么在實際生產(chǎn)中所使用的標(biāo)準(zhǔn)溶液濾膜/芯起泡點值，必須高于驗證試驗中實際使用的濾膜的最小起泡點值。
微生物截留試驗應(yīng)選擇0.45微米孔徑的濾膜作為每個試驗的陽性對照。挑戰(zhàn)微生物的尺寸需要能夠穿透過0.45微米的濾膜，以證明它培養(yǎng)到合適的大小和濃度。三個不同批號的0.22微米（或0.2微米）測試濾膜和0.45微米的對照濾膜都需在一個試驗系統(tǒng)中平行在線進行挑戰(zhàn)試驗。
應(yīng)盡可能將挑戰(zhàn)微生物直接接種在藥品中進行細菌挑戰(zhàn)。但是藥品和/或工藝條件本身可能會影響挑戰(zhàn)微生物的存活力，因此在進行細菌截留實驗之前，需要確認挑戰(zhàn)微生物于工藝條件下在藥品中的存活情況，以確定合理的細菌挑戰(zhàn)方法，也即活度實驗（生存性實驗）。如果使用替代溶液進行試驗，需要提供合理的數(shù)據(jù)和解釋。對于同一族產(chǎn)品，即具有相同組分而不同濃度的產(chǎn)品，可以用挑戰(zhàn)極限濃度的方法進行驗證。過濾溫度、過濾時間、過濾批量和壓差或流速會影響細菌截留試驗的結(jié)果。

1.3 可提取物和浸出物試驗
浸出物存在于最終原料藥和藥品中，通常包含在可提取物內(nèi)，但由于分離和檢測方法的限制以及浸出物的量極小，很難被定量或定性。應(yīng)先獲得最差條件下的可提取物數(shù)據(jù)，將其用于藥品的安全性評估。可提取物反映了浸出物的最大可能，無論是否要做浸出物試驗，可提取物的測試和評估都非常重要。
可提取物試驗在選擇模型溶劑之前必須對產(chǎn)品（藥品）處方進行全面的評估。用于測試的模型溶劑應(yīng)能夠模擬實際的藥品處方，同時與過濾器不應(yīng)有化學(xué)兼容性方面的問題。通常應(yīng)具有與產(chǎn)品相同或相似的理化性質(zhì)，如pH值、極性或離子強度等。如果使用了模型溶劑或幾種溶液合并的方式，則必須提供溶液選擇的合理依據(jù)。
可提取物試驗可以用靜態(tài)浸泡或循環(huán)流動的方法，其影響因素包括滅菌方法、沖洗、過濾流體的化學(xué)性質(zhì)、工藝時間、工藝溫度、過濾量與過濾膜面積之比等。使用最長過濾時間、最高過濾溫度、最多次蒸汽滅菌循環(huán)、增加伽瑪輻射的次數(shù)和劑量都可能會增加可提取物水平。可提取物試驗應(yīng)使用滅菌后的濾器來完成。用于試驗的過濾器盡量不進行預(yù)沖洗。
可提取物和浸出物的檢測方法包括定量和定性兩類。如非揮發(fā)性殘留物（NVR）、紫外光譜、反相高效液相色譜法（RP-HPLC）、傅立葉變換紅外光譜法（FTIR）、氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）、液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）、總有機碳分析（TOC）等。為了保證分析方法的可靠性，需對分析方法進行驗證或確認。選擇哪幾種分析方法，取決于實際的藥品和生產(chǎn)工藝以及過濾器生產(chǎn)商對過濾器的充分研究。
在完成可提取物或者浸出物試驗后，應(yīng)針對過濾器可提取物或浸出物的種類和含量，結(jié)合藥品最終劑型中的濃度、劑量大小、給藥時間、給藥途徑等對結(jié)果進行安全性評估，以評估可提取物和浸出物是否存在安全性風(fēng)險。

1.4 化學(xué)兼容性試驗
化學(xué)兼容性試驗用來評估在特定工藝條件下，待過濾介質(zhì)對過濾裝置的化學(xué)影響。
化學(xué)兼容性試驗應(yīng)涵蓋整個過濾裝置，不只是濾膜。試驗的設(shè)計應(yīng)考慮待過濾介質(zhì)性質(zhì)、過濾溫度和接觸時間等。試驗過程中的過濾時間應(yīng)達到或者超過實際生產(chǎn)過程的最長工藝時間，過濾溫度應(yīng)達到或者超過生產(chǎn)過程的最高溫度。
化學(xué)兼容性試驗檢測項目一般包括：過濾器接觸待過濾介質(zhì)前后的目視檢查；過濾過程中流速變化；濾膜重量/厚度的變化；過濾前后起泡點等完整性測試數(shù)值的變化；濾膜拉伸強度的變化；濾膜電鏡掃描確認等。應(yīng)基于對濾膜和濾器材料的充分了解，綜合選擇上述多種檢測方法。

1.5 吸附試驗
待過濾介質(zhì)中的某些成分粘附在濾器上的過程，可能影響待過濾介質(zhì)的組成和濃度。過濾器中吸附性的材料包括濾膜、外殼和支撐性材料。流速、過濾時間、待過濾介質(zhì)濃度、防腐劑濃度、溫度和pH值等因素都可能影響吸附效果。

1.6 基于產(chǎn)品完整性試驗
應(yīng)明確過濾器使用后完整性測試的潤濕介質(zhì)。如果采用的潤濕介質(zhì)為藥液，則應(yīng)進行產(chǎn)品相關(guān)完整性標(biāo)準(zhǔn)的驗證以支持該標(biāo)準(zhǔn)的確定。實驗室規(guī)模下按比例縮小的研究是產(chǎn)品完整性試驗的第一部分。第二部分是在實際工藝條件下定期監(jiān)測產(chǎn)品起泡點或者產(chǎn)品擴散流的趨勢，作為驗證的一部分。

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