酵母雙雜交體系相比較其他蛋白互作技術(shù)有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì).
①真實(shí)：酵母細(xì)胞是真核細(xì)胞，蛋白質(zhì)有可能保持天然的折疊狀態(tài)，類似其在體內(nèi)生理狀態(tài)下的情況，相比較其他體外驗(yàn)證方法，它所驗(yàn)證的蛋白質(zhì)間相互作用將更接近于體內(nèi)的真實(shí)情況。
②靈敏：雙雜交系統(tǒng)的敏感度極高，蛋白質(zhì)之間結(jié)合常數(shù)低至1mmol/L 左右的微弱作用都可被檢測(cè)到。許多微弱或短暫的蛋白質(zhì)之間的相互作用可以借助報(bào)道基因表達(dá)過(guò)程中的多級(jí)放大效應(yīng)反映出來(lái)。
③效率：在篩選cDNA 文庫(kù)時(shí)，雙雜交系統(tǒng)能夠簡(jiǎn)捷地得到編碼相互作用蛋白的基因序列，它只需構(gòu)建質(zhì)粒而不必準(zhǔn)備抗體或純化蛋白，省略了其它體外檢測(cè)蛋白之間相互作用方法所必須的蛋白抽提、純化等繁瑣步驟。
一、實(shí)驗(yàn)流程
①真實(shí)：酵母細(xì)胞是真核細(xì)胞，蛋白質(zhì)有可能保持天然的折疊狀態(tài)，類似其在體內(nèi)生理狀態(tài)下的情況，相比較其他體外驗(yàn)證方法，它所驗(yàn)證的蛋白質(zhì)間相互作用將更接近于體內(nèi)的真實(shí)情況。
②靈敏：雙雜交系統(tǒng)的敏感度極高，蛋白質(zhì)之間結(jié)合常數(shù)低至1mmol/L 左右的微弱作用都可被檢測(cè)到。許多微弱或短暫的蛋白質(zhì)之間的相互作用可以借助報(bào)道基因表達(dá)過(guò)程中的多級(jí)放大效應(yīng)反映出來(lái)。
③效率：在篩選cDNA 文庫(kù)時(shí)，雙雜交系統(tǒng)能夠簡(jiǎn)捷地得到編碼相互作用蛋白的基因序列，它只需構(gòu)建質(zhì)粒而不必準(zhǔn)備抗體或純化蛋白，省略了其它體外檢測(cè)蛋白之間相互作用方法所必須的蛋白抽提、純化等繁瑣步驟。
- 輔助啟動(dòng)子的設(shè)計(jì)及誘餌載體的構(gòu)建；
- 誘餌質(zhì)粒的自激活檢測(cè)；
- 文庫(kù)質(zhì)粒和誘餌質(zhì)粒共轉(zhuǎn)酵母感受態(tài)細(xì)胞；
- 文庫(kù)篩選和3AT優(yōu)化；
- 文庫(kù)篩選結(jié)果測(cè)序分析；
- 篩選結(jié)果回轉(zhuǎn)驗(yàn)證。
- 詳細(xì)報(bào)告的整理和數(shù)據(jù)發(fā)送。
1：使用定制特色文庫(kù)：使用優(yōu)化后的clonetech的pGADT7或者pGADT7-Rec2兩套載體構(gòu)建酵母文庫(kù)；
2：使用商品化cDNA文庫(kù)。
一、服務(wù)詳情2：使用商品化cDNA文庫(kù)。
(1)無(wú)自激活
| 實(shí)驗(yàn)階段 | 周期（工作日） | 交付材料 | 報(bào)價(jià) | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| A、誘餌質(zhì)粒的合成及擴(kuò)增 | 15-20 | 1、誘餌質(zhì)粒 2、自激活檢測(cè)圖片+功能驗(yàn)證圖片（膜體系） 3、初篩圖片 4、復(fù)篩圖片 5、測(cè)序及分析結(jié)果+陽(yáng)性克隆菌液 6、驗(yàn)證圖片+驗(yàn)證的AD質(zhì)粒 7、驗(yàn)證圖片 8、項(xiàng)目報(bào)告 |
詢價(jià) | ||||||
| B、自激活檢測(cè)及毒性檢測(cè)+功能驗(yàn)證（膜體系） | 5-7 | ||||||||
| C、初篩 | 5-7 | ||||||||
| D、復(fù)篩 | 2-4 | ||||||||
| E、陽(yáng)性克隆測(cè)序 | 2-4 | ||||||||
| F、一對(duì)一驗(yàn)證（點(diǎn)對(duì)點(diǎn)） | 5-7 | ||||||||
| G、點(diǎn)板驗(yàn)證 | 3-4 | ||||||||
| K、項(xiàng)目結(jié)束 | 1-2 | ||||||||
| 注：功能驗(yàn)證通過(guò)證明該誘餌適用于膜體系雙雜篩庫(kù)系統(tǒng)，功能驗(yàn)證沒(méi)有通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)束。 | |||||||||
| 實(shí)驗(yàn)階段 | 周期（工作日） | 交付材料 | 報(bào)價(jià) | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| A、誘餌質(zhì)粒的合成及擴(kuò)增 | 15-20 | 1、誘餌質(zhì)粒 2、自激活檢測(cè)圖片+功能驗(yàn)證圖片（膜體系） 3、自激活抑制圖片(45MM3-AT濃度不能抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)束) 4、初篩圖片 5、復(fù)篩圖片 6、測(cè)序及分析結(jié)果+陽(yáng)性克隆菌液 7、驗(yàn)證圖片+驗(yàn)證的AD質(zhì)粒 8、驗(yàn)證圖片 9、項(xiàng)目報(bào)告 |
詢價(jià) | ||||||
| B、自激活檢測(cè)及毒性檢測(cè)+功能驗(yàn)證（膜體系） | 5-7 | ||||||||
| C、自激活抑制 | 5-7 | ||||||||
| D、初篩 | 5-7 | ||||||||
| E、復(fù)篩 | 2-4 | ||||||||
| F、陽(yáng)性克隆測(cè)序 | 2-4 | ||||||||
| G、一對(duì)一驗(yàn)證（點(diǎn)對(duì)點(diǎn)） | 5-7 | ||||||||
| H、點(diǎn)板驗(yàn)證 | 3-4 | ||||||||
| I、項(xiàng)目結(jié)束 | 1-2 | ||||||||
| 注：功能驗(yàn)證通過(guò)證明該誘餌適用于膜體系雙雜篩庫(kù)系統(tǒng)，功能驗(yàn)證沒(méi)有通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)束。 | |||||||||
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