SRAP技術(shù)

一．SRAP技術(shù)簡(jiǎn)介

    相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性(Sequence—related amplified polymorphism，SRAP)是一種新型的基于PCR的標(biāo)記系統(tǒng)，為顯性標(biāo)記，是由美國(guó)加州大學(xué)蔬菜系Li與Quiros博士于2001年在蕓薹屬作物開(kāi)發(fā)出來(lái)。該標(biāo)記通過(guò)獨(dú)特的雙引物設(shè)計(jì)對(duì)基因的ORFs(Open reading frames開(kāi)放閱讀框 )的特定區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增，上游引物長(zhǎng)17bp，對(duì)外顯子區(qū)域進(jìn)行特異擴(kuò)增。下游引物長(zhǎng)18bp，對(duì)內(nèi)含子區(qū)域、啟動(dòng)子區(qū)域進(jìn)行特異擴(kuò)增。因不同個(gè)體以及物種的內(nèi)含子、啟動(dòng)子與間隔區(qū)長(zhǎng)度不同而產(chǎn)生多態(tài)性。該標(biāo)記具有簡(jiǎn)便、高效、產(chǎn)率高、高共顯性、重復(fù)性好、易測(cè)序、便于克隆目標(biāo)片段的特點(diǎn)。目前已成功地應(yīng)用于作物遺傳多樣性分析、遺傳圖譜的構(gòu)建、重要性狀的標(biāo)記以及相關(guān)基因的克隆等方面。

二．SRAP技術(shù)流程：

    ★ 引物選擇

    ★ PCR擴(kuò)增 

    ★ PAGE檢測(cè)或瓊脂糖電泳檢測(cè) 

    ★ 數(shù)據(jù)分析或克隆及測(cè)序

    ★ 序列分析        

三．客戶提供：

    ★  基因組DNA：

       ●至少15μL樣品，濃度為50-100ng/μL；

       ●2%瓊脂糖電泳檢測(cè)有DNA主帶，沒(méi)有降解；

       ●DNA經(jīng)過(guò)DNA純化試劑盒或磁珠純化；

       ●DNA需溶解在TE或滅菌的去離子水里；

       ●DNA溶解后，肉眼看不到雜色；

    ★ 植物材料： 新鮮組織，葉片采用硅膠干燥后或干冰運(yùn)輸；

    ★ 動(dòng)物材料： 新鮮組織，無(wú)水乙醇封存低溫運(yùn)輸；