液相芯片在臨床｜腫瘤標(biāo)志物中的檢測(cè)

  腫瘤標(biāo)志物是指在惡性腫瘤發(fā)生和增殖過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)而合成分泌的或是由機(jī)體對(duì)腫瘤反應(yīng)而異常產(chǎn)生和/或升高的，反映腫瘤存在和生長(zhǎng)的一類(lèi)物質(zhì)。腫瘤標(biāo)志物存在于病人的血液、體液、細(xì)胞或組織中，可用生物化學(xué)、免疫學(xué)及分子生物學(xué)等方法測(cè)定，且對(duì)腫瘤的輔助診斷、鑒別診斷、觀察療效、監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)以及預(yù)后評(píng)價(jià)具有一定的價(jià)值。

腫瘤標(biāo)志物可用于判斷癌癥病程分期，體循環(huán)癌癥生物標(biāo)志物可反映機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫應(yīng)激以及腫瘤及其微環(huán)境之間的相互作用。單一的生物標(biāo)志物往往不足以可信區(qū)分腫瘤與非腫瘤；多重檢測(cè)技術(shù)使得同步化檢測(cè)多種癌癥生物標(biāo)志物成為可能，是通向改善診斷和治療的重要途徑。

某些腫瘤發(fā)生前或發(fā)生時(shí)常有慢性炎癥。已有研究證實(shí)，炎癥介質(zhì)、炎癥相關(guān)基因多態(tài)性與癌變之間存在病原學(xué)關(guān)系。潛在的炎癥過(guò)程可通過(guò)不同的機(jī)理影響腫瘤間室與癌癥分期。從目前的研究來(lái)看，慢性炎癥似乎總是先刺激而后抑制腫瘤的發(fā)展。而大多數(shù)的腫瘤都可以從免疫細(xì)胞中獲益并依賴免疫細(xì)胞。慢性炎癥的持續(xù)存在在啟動(dòng)、維持、促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)中發(fā)揮重要作用。因此調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)仍將是治療干預(yù)的理想目標(biāo)。

腫瘤是失去了正常生物調(diào)控的異常生長(zhǎng)、分化的細(xì)胞和組織。和其他疾病比較，腫瘤有兩個(gè)明顯的臨床特征：一是腫瘤的轉(zhuǎn)移特性。二是早、中期腫瘤無(wú)癥狀。對(duì)于無(wú)癥狀的腫瘤病人，腫瘤標(biāo)志物常常是唯一的能早期發(fā)現(xiàn)腫瘤的線索。

胚胎蛋白標(biāo)志，甲胎蛋白（α-fetoprotein, AFP）和癌胚抗原 (carcioembryonic antigen，CEA)的發(fā)現(xiàn)推動(dòng)了腫瘤標(biāo)志物的臨床應(yīng)用，腫瘤標(biāo)志物開(kāi)始用于腫瘤輔助診斷、治療監(jiān)測(cè)。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，大量腫瘤標(biāo)志物被發(fā)現(xiàn)和使用。腫瘤標(biāo)志物大多都有敏感度高的特點(diǎn)，但由于組織特異性不強(qiáng)，一般以多個(gè)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合使用來(lái)增加特異性。

主要的腫瘤標(biāo)志物作用：

常用腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合指標(biāo)：

MILLIPLEX MAP提供最常用的25種腫瘤標(biāo)志物，可以自由組合用于不同腫瘤早期發(fā)現(xiàn)的臨床研究和新腫瘤標(biāo)志物的驗(yàn)證。與細(xì)胞因子組合聯(lián)合使用，有助于深入研究腫瘤免疫，及腫瘤疾病分期和預(yù)后研究。

對(duì)腫瘤細(xì)胞的信號(hào)通路了解有助于了解癌細(xì)胞在生長(zhǎng)、分化、增殖和凋亡過(guò)程中與正常細(xì)胞的區(qū)別，進(jìn)而找到抗癌藥物的作用靶點(diǎn)。這類(lèi)與信號(hào)通路相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物具有廣譜性，往往可用于對(duì)肺癌、胰腺癌、乳腺癌等多種組織癌變的生物學(xué)機(jī)制進(jìn)行研究和新藥發(fā)現(xiàn)。

MILLIPLEX MAP提供多種調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移相關(guān)的信號(hào)通路組合，包括了細(xì)胞凋亡、免疫通路、Akt mTOR和MAPK通路等。

液相芯片技術(shù)優(yōu)勢(shì) 
 

• 高通量：同時(shí)對(duì)同一樣本多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，節(jié)省樣本、試劑、時(shí)間和精力；高通量樣品處理和高通量96/384空板同時(shí)上樣檢測(cè)。
• 操作簡(jiǎn)單，減少實(shí)驗(yàn)誤差，具有更好的穩(wěn)定性（激光，熒光技術(shù)；液相環(huán)境更好實(shí)現(xiàn)檢測(cè)物化學(xué)穩(wěn)定性）、更好的重復(fù)性與批間差（100個(gè)微球的平均實(shí)驗(yàn)結(jié)果）。
• 靈活性好：開(kāi)放實(shí)現(xiàn)平臺(tái)，同一機(jī)器可以用于免疫分析，核酸檢測(cè)，酶學(xué)分析，受體配體識(shí)別等多種研究工作。不同檢測(cè)指標(biāo)可以自由組合，滿足不同科研和臨床需求。
• 靈敏度高（下表）：液相芯片最低檢測(cè)濃度可達(dá)到1pg/ml，線性范圍寬，可達(dá)4個(gè)數(shù)量級(jí)；與ELISA和質(zhì)譜分析具有很強(qiáng)的一致性。
• 樣本用量少：小于50ul樣本可分析多達(dá)500個(gè)指標(biāo)。
• 成本低：隨著檢測(cè)指標(biāo)的增多，成本越低，單次單個(gè)指標(biāo)計(jì)算，成本明顯低于其他檢測(cè)方法。

                      液相芯片與其他檢測(cè)方法靈敏度和線性范圍比較 
 

 xMAP技術(shù)與ELISA免疫檢測(cè)的比較：
對(duì)于傳統(tǒng)的ELISA，人們發(fā)現(xiàn)每次只能檢測(cè)一種指標(biāo)，而xMAP技術(shù)的出現(xiàn)，使得在同一份樣本中檢測(cè)指標(biāo)數(shù)高達(dá)500個(gè)，為科學(xué)家們提供了一個(gè)快速、靈活、高通量的檢測(cè)平臺(tái)。
以80份檢測(cè)樣本中的10個(gè)蛋白指標(biāo)進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，比較如下：

Millipore長(zhǎng)期致力于蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域的研究和發(fā)展，從細(xì)胞外到細(xì)胞內(nèi)建立了高品質(zhì)的蛋白質(zhì)研究平臺(tái)，開(kāi)創(chuàng)了蛋白質(zhì)研究的全新時(shí)代，也是全球首家可以提供最新FLEXMAP 3DTM分析平臺(tái)的公司。Milliplex的多功能液相芯片平臺(tái)基于xMAP技術(shù)，造就了Milliplex液相芯片系統(tǒng)無(wú)與倫比的檢測(cè)特異性和靈敏度。

本實(shí)驗(yàn)室除了提供液相芯片技術(shù)以外，還提供流式細(xì)胞分選 ，ChIP｜Co-IP免疫共沉淀，Pull Down，活細(xì)胞工作站，WB，流式細(xì)胞成像，基因載體構(gòu)建，細(xì)胞基因敲除等高端技術(shù) 。