聯(lián)科生物凋亡試劑盒AP101檢測(cè)步驟

瀏覽次數(shù)：4837　發(fā)布日期：2014-12-7　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

聯(lián)科生物凋亡檢測(cè)試劑盒（Annexin V/PI apoptosis kit，Cat#：AP101）是用FITC標(biāo)記的重組人Annexin V來(lái)檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面的磷脂酰絲氨酸的一種細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒�？梢允褂昧魇郊�(xì)胞儀，熒光顯微鏡或其他熒光檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)。

本試劑盒還提供了碘化丙啶（PI）染色液，PI可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，呈現(xiàn)紅色熒光。對(duì)于壞死細(xì)胞，由于細(xì)胞膜的完整性已經(jīng)喪失，Annexin V-FITC可以進(jìn)入到細(xì)胞漿內(nèi)，與位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸結(jié)合，從而也使壞死細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開來(lái)。

試劑盒組分

目錄號(hào)/規(guī)格組分	AP101-30	AP101-60	AP101-100
目錄號(hào)/規(guī)格組分	30T	60T	100T
Annexin V-FITC	150ul	300ul	500ul
5x Binding Buffer	5ml	10ml	15ml
Propidium Iodide(PI)	300ul	600ul	1000ul

試劑盒步驟

樣品處理

(1)、用合適的方法誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；

(2)、懸浮細(xì)胞離心（1500rpm 離心 5min）收集；貼壁細(xì)胞用不含EDTA的胰酶消化并用含血清培養(yǎng)基洗一次（注：胰酶消化時(shí)間不易過(guò)長(zhǎng)，否則容易引起假陽(yáng)性）；或直接用Accutase酶消化（無(wú)需終止）；1500rpm 離心 5min收集細(xì)胞；

(3)、用PBS洗滌細(xì)胞兩次（1500rpm離心5min）收集1-5 X105細(xì)胞，棄上清；

(4)、制備1X Binding Buffer緩沖液：按10次分析的量計(jì)算，加1ml 5X Binding Buffer緩沖液到4ml的去離子水；

(5)、用500ul 1X Binding Buffer重懸細(xì)胞(第4步稀釋的緩沖液）

(6)、加入5ul annexin-V FITC和10ul PI

(7)、避光室溫孵育5分鐘

(8)、上機(jī)檢測(cè)

流式檢測(cè)

流式分析Annexin-V FITC（放射波長(zhǎng)=488nm；吸收波長(zhǎng)=530nm）用FITC信號(hào)檢測(cè)（通常是FL1通道）；PI染液用PE信號(hào)檢測(cè)（通常是FL2通道）

閱讀原文：http://www.liankebio.com/TechServiceShow/articleID/2014120007.html

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標(biāo)簽：聯(lián)科、聯(lián)科生物凋亡 Annexin V。