Bestatin烏苯美司作用原理-MCE
Bestatin烏苯美司 (Ubenimex) 是 CD13 (Aminopeptidase N)/APN 和 leukotriene A4 hydrolase 抑制劑，常用于癌癥研究。
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生物活性
體外研究
Bestatin烏苯美司增強了全反式維甲酸（ATRA）誘導的分化，并抑制了在ATRA敏感的急性早幼粒細胞白血�。ˋPL）NB4細胞中由ATRA驅動的p38 MAPK磷酸化。Bestatin烏苯美司無法逆轉在ATRA耐藥的APL MR2細胞中的分化阻滯。與抗CD13抗體WM-15結合的CD13導致p38 MAPK的磷酸化，減少了Bestatin烏苯美司對p38 MAPK磷酸化的抑制，并完全消除了Bestatin烏苯美司對NB4細胞中ATRA誘導分化的增強作用[2]。經過Bestatin烏苯美司（600 μM）處理的細胞在細胞周期中的進展速度減緩，這是由于細胞生長速率和細胞分裂頻率降低。Bestatin烏苯美司抑制了黏菌(D. discoideum)中有絲分裂的頻率及其固有的多核性，在0-600 μM濃度下對黏菌細胞無細胞毒性。Bestatin烏苯美司分別抑制PsaA-GFP和GFP表達細胞裂解液中的氨肽酶活性69.39%和39.93%[4]。
體內研究
Bestatin烏苯美司（20 μM）顯著降低糖尿病小鼠中CD13的表達，并且與糖尿病車輛處理的小鼠相比，MMP-9特異性明膠酶帶密度顯著抑制。Bestatin烏苯美司處理顯著抑制糖尿病小鼠中VEGF和肝素酶的表達。玻璃體內注射Bestatin烏苯美司顯著下調糖尿病小鼠視網膜中HIF-1α和VEGF的表達。此外，糖尿病小鼠視網膜中上調的肝素酶表達被玻璃體內注射最佳坦顯著抑制[1]。在抗原增強的對SRBC的體液免疫反應之前，給予Bestatin烏苯美司（10、1和0.1 mg/kg，腹腔注射）治療，可以增加產生溶血性抗SRBC抗體（PFC）的脾細胞數量，以及2-ME耐受的血清凝集素滴度（在0.1 mg/kg劑量下）。在環(huán)磷酰胺注射后，每隔一天將Bestatin烏苯美司（1和0.1 mg/kg）給小鼠五次，并不會改變該藥物對于PFC數量的抑制作用，甚至在抗原刺激后第7天以1 mg/kg劑量時，進一步減少總的抗SRBC凝集素[3]。
實驗參考方法
激酶測定
細胞被收集、洗滌并在 NP-40 裂解緩沖液中裂解（50 mM Tris-HCl [pH 7.5], 150 mM NaCl, 0.5% NP-40）。使用布拉德福德法定量總細胞蛋白，并制備 1 mg/mL 蛋白質分裝。將 10 微升的總細胞蛋白與 290 微升底物溶液（0.1 mg/mL 二硫蘇糖醇 [DTT]，0.1 mg/mL 白蛋白和 1 mM 丙氨酸-β-萘胺）混合。經過 15 分鐘和 30 分鐘后進行熒光測定（340 nm 激發(fā)，400 nm 發(fā)射）。15 分鐘和 30 分鐘測定結果之間的斜率用于表示氨肽酶活性。在熒光氨肽酶測定之前，總細胞蛋白與最佳素、阿馬斯坦、噻唑霉素、EDTA 和/或 ZnCl2 預孵育 20 分鐘。
細胞測定
正在生長的細胞（1×10^6 到 2×10^6 細胞/mL）被稀釋至 1.0×10^3 細胞/mL，并轉移（3 mL）到一個 12 孔多孔板的孔中（直徑 2.5 厘米/孔）。細胞與 0、10、50、100、300 或 600 μM 最佳素處理，并在 21°C 下以 180 rpm 搖動培養(yǎng) 48 小時。使用血細胞計數板在 0、24 和 48 小時后測量細胞密度。 相關產品推薦：Bestatin烏苯美司 hydrochloride鹽酸烏苯美司
MCE 未獨立確認這些方法的準確性。僅供參考。
動物給藥
最佳素溶解在 PBS 中。該試劑（劑量為 10、1 和 0.1 mg/kg）被腹腔注射到未經環(huán)磷酰胺處理的小鼠體內，注射 5 次或 10 次，每次間隔 24 小時，在 SRBC 免疫前。小鼠在最后一次注射最佳素后 24 小時進行免疫。通過在 SRBC 免疫前 12 天，以 350 mg/kg 的劑量單次腹腔注射環(huán)磷酰胺誘導藥理免疫抑制。在環(huán)磷酰胺免疫抑制的小鼠中，以 1 和 0.1 mg/kg 的劑量腹腔注射最佳素，5 次每 48 小時一次或 10 次每 24 小時一次，直到 SRBC 免疫。最佳素的第一劑量在環(huán)磷酰胺注射 24 小時后給藥，而最后一劑在 SRBC 免疫前 24 小時注射。
參考文獻
[1]. Hossain A, et al. Protective effects of Bestatin烏苯美司 in the retina of streptozotocin-induced diabetic mice. Exp Eye Res. 2016 Aug;149:100-6
[2]. Qian X, et al. Inhibition of p38 MAPK Phosphorylation Is Critical for Bestatin烏苯美司 to Enhance ATRA-Induced Cell Differentiation in Acute Promyelocytic Leukemia NB4 Cells. Am J Ther. 2016 May-Jun;23(3):e680-9.
[3]. Lis M, et al. The effects of Bestatin烏苯美司 on humoral response to sheep erythrocytes in non-treated and cyclophosphamide-immunocompromised mice. Immunopharmacol Immunotoxicol. 2013 Feb;35(1):133-8
[4]. Poloz Y, et al. Bestatin烏苯美司 inhibits cell growth, cell division, and spore cell differentiation in Dictyostelium discoideum. Eukaryot Cell. 2012 Apr;11(4):545-57
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生物活性
體外研究
Bestatin烏苯美司增強了全反式維甲酸（ATRA）誘導的分化，并抑制了在ATRA敏感的急性早幼粒細胞白血�。ˋPL）NB4細胞中由ATRA驅動的p38 MAPK磷酸化。Bestatin烏苯美司無法逆轉在ATRA耐藥的APL MR2細胞中的分化阻滯。與抗CD13抗體WM-15結合的CD13導致p38 MAPK的磷酸化，減少了Bestatin烏苯美司對p38 MAPK磷酸化的抑制，并完全消除了Bestatin烏苯美司對NB4細胞中ATRA誘導分化的增強作用[2]。經過Bestatin烏苯美司（600 μM）處理的細胞在細胞周期中的進展速度減緩，這是由于細胞生長速率和細胞分裂頻率降低。Bestatin烏苯美司抑制了黏菌(D. discoideum)中有絲分裂的頻率及其固有的多核性，在0-600 μM濃度下對黏菌細胞無細胞毒性。Bestatin烏苯美司分別抑制PsaA-GFP和GFP表達細胞裂解液中的氨肽酶活性69.39%和39.93%[4]。
體內研究
Bestatin烏苯美司（20 μM）顯著降低糖尿病小鼠中CD13的表達，并且與糖尿病車輛處理的小鼠相比，MMP-9特異性明膠酶帶密度顯著抑制。Bestatin烏苯美司處理顯著抑制糖尿病小鼠中VEGF和肝素酶的表達。玻璃體內注射Bestatin烏苯美司顯著下調糖尿病小鼠視網膜中HIF-1α和VEGF的表達。此外，糖尿病小鼠視網膜中上調的肝素酶表達被玻璃體內注射最佳坦顯著抑制[1]。在抗原增強的對SRBC的體液免疫反應之前，給予Bestatin烏苯美司（10、1和0.1 mg/kg，腹腔注射）治療，可以增加產生溶血性抗SRBC抗體（PFC）的脾細胞數量，以及2-ME耐受的血清凝集素滴度（在0.1 mg/kg劑量下）。在環(huán)磷酰胺注射后，每隔一天將Bestatin烏苯美司（1和0.1 mg/kg）給小鼠五次，并不會改變該藥物對于PFC數量的抑制作用，甚至在抗原刺激后第7天以1 mg/kg劑量時，進一步減少總的抗SRBC凝集素[3]。
實驗參考方法
激酶測定
細胞被收集、洗滌并在 NP-40 裂解緩沖液中裂解（50 mM Tris-HCl [pH 7.5], 150 mM NaCl, 0.5% NP-40）。使用布拉德福德法定量總細胞蛋白，并制備 1 mg/mL 蛋白質分裝。將 10 微升的總細胞蛋白與 290 微升底物溶液（0.1 mg/mL 二硫蘇糖醇 [DTT]，0.1 mg/mL 白蛋白和 1 mM 丙氨酸-β-萘胺）混合。經過 15 分鐘和 30 分鐘后進行熒光測定（340 nm 激發(fā)，400 nm 發(fā)射）。15 分鐘和 30 分鐘測定結果之間的斜率用于表示氨肽酶活性。在熒光氨肽酶測定之前，總細胞蛋白與最佳素、阿馬斯坦、噻唑霉素、EDTA 和/或 ZnCl2 預孵育 20 分鐘。
細胞測定
正在生長的細胞（1×10^6 到 2×10^6 細胞/mL）被稀釋至 1.0×10^3 細胞/mL，并轉移（3 mL）到一個 12 孔多孔板的孔中（直徑 2.5 厘米/孔）。細胞與 0、10、50、100、300 或 600 μM 最佳素處理，并在 21°C 下以 180 rpm 搖動培養(yǎng) 48 小時。使用血細胞計數板在 0、24 和 48 小時后測量細胞密度。 相關產品推薦：Bestatin烏苯美司 hydrochloride鹽酸烏苯美司
MCE 未獨立確認這些方法的準確性。僅供參考。
動物給藥
最佳素溶解在 PBS 中。該試劑（劑量為 10、1 和 0.1 mg/kg）被腹腔注射到未經環(huán)磷酰胺處理的小鼠體內，注射 5 次或 10 次，每次間隔 24 小時，在 SRBC 免疫前。小鼠在最后一次注射最佳素后 24 小時進行免疫。通過在 SRBC 免疫前 12 天，以 350 mg/kg 的劑量單次腹腔注射環(huán)磷酰胺誘導藥理免疫抑制。在環(huán)磷酰胺免疫抑制的小鼠中，以 1 和 0.1 mg/kg 的劑量腹腔注射最佳素，5 次每 48 小時一次或 10 次每 24 小時一次，直到 SRBC 免疫。最佳素的第一劑量在環(huán)磷酰胺注射 24 小時后給藥，而最后一劑在 SRBC 免疫前 24 小時注射。
參考文獻
[1]. Hossain A, et al. Protective effects of Bestatin烏苯美司 in the retina of streptozotocin-induced diabetic mice. Exp Eye Res. 2016 Aug;149:100-6
[2]. Qian X, et al. Inhibition of p38 MAPK Phosphorylation Is Critical for Bestatin烏苯美司 to Enhance ATRA-Induced Cell Differentiation in Acute Promyelocytic Leukemia NB4 Cells. Am J Ther. 2016 May-Jun;23(3):e680-9.
[3]. Lis M, et al. The effects of Bestatin烏苯美司 on humoral response to sheep erythrocytes in non-treated and cyclophosphamide-immunocompromised mice. Immunopharmacol Immunotoxicol. 2013 Feb;35(1):133-8
[4]. Poloz Y, et al. Bestatin烏苯美司 inhibits cell growth, cell division, and spore cell differentiation in Dictyostelium discoideum. Eukaryot Cell. 2012 Apr;11(4):545-57
