TIL療法的最新臨床研究和技術(shù)發(fā)展

文章來(lái)源于：SinoTalk為承諾發(fā)聲，作者： 王哲新 
 
TIL療法最初由Rosenberg團(tuán)隊(duì)在1986年開始研發(fā)。該療法的前提是從患者的腫瘤中提取被稱為TILs的免疫細(xì)胞，在實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)和擴(kuò)增這些細(xì)胞，然后將它們重新引入患者體內(nèi)以靶向并摧毀癌細(xì)胞。TIL療法通過(guò)識(shí)別癌癥新抗原，激活T細(xì)胞免疫反應(yīng)來(lái)根除腫瘤細(xì)胞（這被稱為“細(xì)胞毒性”）。這種精準(zhǔn)醫(yī)療方法提高了反應(yīng)率和緩解的機(jī)會(huì)，這在腫瘤學(xué)領(lǐng)域無(wú)疑是一場(chǎng)革命。
在過(guò)去的幾十年里，大量的研究工作一直致力于擴(kuò)大腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(TIL)和T細(xì)胞的技術(shù)發(fā)展，以及臨床程序的制定。TIL療法已經(jīng)發(fā)展到了獲得批準(zhǔn)上市的階段——Iovance公司的lifileucel已經(jīng)獲得FDA的批準(zhǔn)上市。還有一些關(guān)鍵領(lǐng)域需要進(jìn)一步發(fā)展，包括對(duì)其效力的評(píng)估，增強(qiáng)對(duì)“熱”和“冷”癌癥的臨床療效，優(yōu)化制造過(guò)程，降低總體生產(chǎn)成本，以及提高這種方式的可及性。
為了成功地將TIL療法納入臨床實(shí)踐，有必要擴(kuò)大其在嚴(yán)重未滿足醫(yī)療需求的實(shí)體腫瘤類型中的治療應(yīng)用，建立最佳的治療程序臨床方案，簡(jiǎn)化生產(chǎn)流程，并進(jìn)行相關(guān)的臨床試驗(yàn)。此外，下一代TIL療法的持續(xù)研究已經(jīng)在進(jìn)行中，實(shí)際世界數(shù)據(jù)的積累將有助于促進(jìn)和證實(shí)這一領(lǐng)域的進(jìn)一步發(fā)展。
TIL在實(shí)體癌治療中相對(duì)于CAR-T和TCR-T的優(yōu)勢(shì)
過(guò)繼細(xì)胞療法(ACT)代表了癌癥治療的一個(gè)動(dòng)態(tài)前沿，利用免疫系統(tǒng)的潛力來(lái)靶向和殺死腫瘤細(xì)胞。這種方法包括多種策略，包括腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(TIL)、表達(dá)新型T細(xì)胞受體(TCR)的基因修飾T細(xì)胞和嵌合抗原受體(CAR)。這些療法在各種腫瘤類型中顯示出相當(dāng)大的前景，并且在世界范圍內(nèi)進(jìn)行了多項(xiàng)臨床試驗(yàn)以進(jìn)一步優(yōu)化這種治療方式。
CAR-T療法在治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤，如b細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)、某些類型的非霍奇金淋巴瘤和白血病方面顯示出顯著的療效和成功。多種CAR-T產(chǎn)品已獲得監(jiān)管部門批準(zhǔn)，并在臨床應(yīng)用中取得巨大成功。然而，CAR-T療法有幾個(gè)相當(dāng)大的局限性:(1)它伴有嚴(yán)重的副作用，如細(xì)胞因子釋放綜合征(CRS)、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)和神經(jīng)毒性;(2) CAR-T療法對(duì)血癌療效顯著，然而其治療實(shí)體瘤的有效性仍然很差。
TCR-T療法在靶向多種實(shí)體瘤方面顯示出潛力。它可以針對(duì)特定的腫瘤抗原進(jìn)行定制，包括來(lái)自MHC分子呈遞的細(xì)胞內(nèi)蛋白的抗原，使其更適合靶向?qū)嶓w瘤。事實(shí)上，它已經(jīng)顯示出治療實(shí)體瘤而不是血癌的臨床療效，正如許多關(guān)于TCR-T療法的研究和評(píng)論文章所討論的那樣。FDA已批準(zhǔn)來(lái)自Adaptimmune 公司的TCR-T細(xì)胞療法的產(chǎn)品上市。TCR-T療法的局限性包括：（1）當(dāng)前領(lǐng)域缺乏非常特異性的抗原靶標(biāo)，（2）當(dāng)誘導(dǎo)脫靶毒性（即TCR識(shí)別正常組織中表達(dá)的抗原）時(shí)，除了CRS和神經(jīng)毒性外，還有潛在的致命副作用，（3）HLA限制——需要匹配HLA類型才能使α-βTCR發(fā)揮作用，（4）制造過(guò)程可能很復(fù)雜。
TIL療法可以用于治療多種癌癥類型。它依賴于從患者的腫瘤中提取免疫細(xì)胞。TILs浸潤(rùn)到腫瘤部位，因此，這些細(xì)胞已經(jīng)將腫瘤識(shí)別為外來(lái)抗原。通過(guò)分離和擴(kuò)增，這些TIL可用于精確靶向和攻擊癌細(xì)胞。TIL是從患者自身的腫瘤中提取的。因此，它是針對(duì)每位患者量身定制的。這最大限度地降低了通常與同種異體治療相關(guān)的排斥反應(yīng)或移植物抗宿主�。℅VHD）的風(fēng)險(xiǎn)。
TIL療法雖然通常耐受性良好且平安無(wú)事，但確實(shí)存在相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)和潛在副作用。輸注后可立即導(dǎo)致一過(guò)性呼吸困難、寒戰(zhàn)和發(fā)熱。這些不良事件（adverseevents，AEs）通常與血清循環(huán)細(xì)胞因子水平升高無(wú)關(guān)，不應(yīng)與細(xì)胞因子釋放綜合征混為一談，后者常見(jiàn)于其他細(xì)胞療法，如嵌合抗原受體（chimericantigenreceptor，CAR）T細(xì)胞療法。TIL療法針對(duì)多種實(shí)體瘤進(jìn)行了研究，包括黑色素瘤、宮頸癌、肺癌、乳腺癌以及最近的胃腸癌。這使其成為一系列癌癥類型的潛在有價(jià)值的治療選擇。
TIL療法的局限性包括：（1）目前TIL療法的制造過(guò)程是勞動(dòng)密集型、耗時(shí)且昂貴的，以及（2）難以獲得腫瘤組織，尤其是在晚期癌癥患者中。
綜上所述，CAR-T細(xì)胞療法最適合血液系統(tǒng)惡性腫瘤，TCR-T細(xì)胞療法對(duì)實(shí)體瘤顯示出前景，而TIL療法目前對(duì)黑色素瘤和潛在的其他實(shí)體瘤最有效。作為新興的基于T細(xì)胞的方式，所有這些都提供了有前途的癌癥治療方法，每種方法都有自己的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。應(yīng)根據(jù)癌癥類型、患者的醫(yī)療狀況和醫(yī)療機(jī)構(gòu)的治療可用性等因素仔細(xì)選擇特定的免疫治療方法。了解每種療法的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)和局限性可以指導(dǎo)它們?cè)谂R床實(shí)踐中的應(yīng)用，以最大限度地提高患者的預(yù)后。
TIL療法的最新臨床進(jìn)展
近年來(lái)，隨著TIL療法發(fā)展到一定的成熟水平，許多臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中。由學(xué)術(shù)團(tuán)體或生物技術(shù)公司領(lǐng)導(dǎo)的近50項(xiàng)試驗(yàn)正在進(jìn)行中，針對(duì)免疫學(xué)上“熱”實(shí)體瘤和最近的“冷”實(shí)體瘤，詳情請(qǐng)見(jiàn)下附表。
 
 
TIL療法的技術(shù)發(fā)展
下圖1展示了下一代腫瘤浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞（TIL）制備的流程概覽。首先，從新鮮切除的腫瘤組織中分離出TIL，然后在體外進(jìn)行培養(yǎng)。在A部分，基于表達(dá)標(biāo)記（如CD39+/CD103+、PD-1、CD39-/CD69-和4-1BB）選擇對(duì)腫瘤有反應(yīng)的T細(xì)胞。在B部分，將腫瘤組織在4-1BB和OX40等抗體的存在下進(jìn)行培養(yǎng)，以誘導(dǎo)高效能的TIL。在C部分，對(duì)TIL進(jìn)行遺傳修飾，以增強(qiáng)其功能，這可能包括通過(guò)轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)引入新的基因或改變現(xiàn)有基因的表達(dá)，從而提高TIL對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別和殺傷能力。這一流程旨在優(yōu)化TIL療法，使其更加精準(zhǔn)和有效。
 
Tumor-reactive TIL selection：在快速擴(kuò)增程序（REP）之前，基于干擾素-γ（IFN-γ）對(duì)腫瘤反應(yīng)性TIL進(jìn)行預(yù)選。在Rosenberg等人的研究中，通過(guò)與自體腫瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞系共培養(yǎng)，篩選出表達(dá)IFN-γ的TIL，用于ACT治療，顯示了在轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者中49%的客觀反應(yīng)率。
Young TILs：這種方法通過(guò)酶消化腫瘤來(lái)分離 TILs，減少初始擴(kuò)增期，直接從腫瘤中分離TIL并進(jìn)行擴(kuò)增，而不是等待它們從腫瘤碎片中遷移出來(lái)。這些“Young TILs”顯示出較長(zhǎng)的端粒和更高水平的CD27和CD28表達(dá)，與從碎片擴(kuò)增的TIL相比，它們?cè)谵D(zhuǎn)移性黑色素瘤患者中顯示出更好的臨床反應(yīng)。在一項(xiàng)研究中，20名轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者中有10名（50%）實(shí)現(xiàn)了客觀臨床反應(yīng)，即2例完全緩解和8例部分緩解（無(wú)進(jìn)展生存期為3至18個(gè)月）。
Neoantigenreactive TILs：過(guò)去幾十年的技術(shù)進(jìn)步使新抗原反應(yīng)性和高效TIL的發(fā)展成為可能，它被認(rèn)為是“下一代TIL療法”。通過(guò)將10種轉(zhuǎn)移性人類腫瘤（包括乳腺癌、黑色素瘤和結(jié)腸癌）的55種新抗原特異性TCR克隆型（NeoTCR）映射到它們的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組，Lowery等人確定了CD8+和CD4+新抗原反應(yīng)性TIL的特征。新抗原特異性TIL表現(xiàn)出腫瘤特異性克隆擴(kuò)增。Achilles Therapeutics開發(fā)了VELOSTM制造工藝，通過(guò)將TIL與對(duì)應(yīng)于患者已鑒定新抗原的自體樹突狀細(xì)胞負(fù)載肽共培養(yǎng)，選擇性地?cái)U(kuò)增克隆新抗原特異性TIL（cNeT）。通過(guò)單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)，能夠識(shí)別出特異性針對(duì)腫瘤新抗原的TIL，并在臨床研究中去驗(yàn)證這些新抗原特異性T細(xì)胞在TIL中的持久性。
Phenotypicmarkers:近年來(lái)的各種技術(shù)發(fā)展使研究人員能夠根據(jù)表型標(biāo)志物識(shí)別和分選腫瘤反應(yīng)性TIL，例如程序性細(xì)胞死亡1（PD-1）、CD39-/CD69-和CD39+/CD103+。這些富集策略將提高臨床療效，需要進(jìn)一步開發(fā)臨床生產(chǎn)和臨床研究。
Highpotency TIL induction: TIL 的有效擴(kuò)增對(duì)于生產(chǎn)和成功的臨床效果至關(guān)重要。研究表明，通過(guò)添加激動(dòng)劑抗體（如4-1BB抗體）可以改善TIL的擴(kuò)增，并在體外和體內(nèi)增強(qiáng)其對(duì)腫瘤的反應(yīng)性。
 
Engineering TIL：使用基因工程技術(shù)對(duì)TIL進(jìn)行工程化改造，包括增強(qiáng)抗腫瘤活性、提高體外擴(kuò)增效率、減少TIL的抑制和耗竭，以及降低IL-2毒性等�？梢允褂冒�括CRISPR基因編輯和轉(zhuǎn)導(dǎo)TIL使用慢病毒平臺(tái)等技術(shù)。
下圖2展示了下一代TIL（腫瘤浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞）治療策略的兩個(gè)關(guān)鍵機(jī)制。A部分描述了通過(guò)CRISPR/Cas9技術(shù)敲除TGFBR2基因，這種敲除可以使T細(xì)胞對(duì)TGF-β（轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β）介導(dǎo)的免疫抑制產(chǎn)生抗性，從而增強(qiáng)T細(xì)胞的效應(yīng)功能、抗腫瘤活性、增殖和持久性，同時(shí)減少調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的形成。B部分介紹了IL-15/IL-15Rα復(fù)合物，稱為IL-15超激動(dòng)劑（sIL-15），它顯著增強(qiáng)了IL-15的生物活性。通過(guò)將sIL-15與αPD-1抗體的Fc結(jié)構(gòu)域結(jié)合，可以隱藏sIL-15與IL-15Rβ的結(jié)合，同時(shí)將sIL-15直接錨定在PD-1+CD8+ T細(xì)胞上，并激活這些細(xì)胞。這種策略旨在降低毒性，同時(shí)保持治療效果，通過(guò)局部增強(qiáng)T細(xì)胞的活性來(lái)對(duì)抗腫瘤，而不是通過(guò)系統(tǒng)性地增加IL-15水平，這樣可以減少可能的副作用。
 
毫無(wú)疑問(wèn)，TIL療法和任何突破性的醫(yī)學(xué)進(jìn)步一樣，都面臨著挑戰(zhàn)。治療過(guò)程的復(fù)雜性、人體免疫系統(tǒng)、涉及的大量費(fèi)用以及潛在的不良反應(yīng)需要不斷的審查和改進(jìn)。然而，醫(yī)學(xué)界對(duì)克服這些障礙的承諾令人鼓舞，使人們相信TIL治療將繼續(xù)發(fā)展成為現(xiàn)代癌癥治療的基石。
總之，TIL療法是通往更有效、更個(gè)性化、更富有同情心的癌癥治療之路。最近對(duì)TIL治療的研究帶來(lái)了有希望的進(jìn)展，解決了該領(lǐng)域的關(guān)鍵挑戰(zhàn)。通過(guò)加強(qiáng)TIL的選擇，克服抑制性TME，以及基因工程的策略應(yīng)用，研究人員正在顯著提高TIL治療的療效和持久性。雖然TIL治療在臨床應(yīng)用的道路上仍然面臨障礙，但該領(lǐng)域的快速進(jìn)展為癌癥免疫治療的未來(lái)帶來(lái)了巨大的希望�？茖W(xué)家、臨床醫(yī)生和生物技術(shù)公司之間持續(xù)的研究努力和合作對(duì)于改進(jìn)TIL治療并加速其轉(zhuǎn)化為臨床實(shí)踐是絕對(duì)必要的，最終使全世界的癌癥患者受益。
 
TIL療法最強(qiáng)輔助IL-2作用
在 TIL 療法中，IL - 2（白細(xì)胞介素 - 2）發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，主要包括以下幾個(gè)方面：
促進(jìn) TIL 細(xì)胞增殖：IL - 2 可以與 TIL 細(xì)胞表面的受體結(jié)合，向細(xì)胞內(nèi)傳遞增殖信號(hào)，刺激 TIL 細(xì)胞分裂和復(fù)制，從而使 TIL 細(xì)胞的數(shù)量快速增加。在 TIL 療法中，從腫瘤組織中提取的 TIL 細(xì)胞數(shù)量往往有限，通過(guò) IL - 2 介導(dǎo)的增殖作用，可以獲得足夠數(shù)量的具有腫瘤殺傷活性的細(xì)胞，用于回輸治療。
增強(qiáng) TIL 細(xì)胞的活性和殺傷能力：IL - 2 能夠激活 TIL 細(xì)胞內(nèi)的一系列信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞合成和分泌細(xì)胞毒性分子，如穿孔素、顆粒酶等，這些分子可以直接作用于腫瘤細(xì)胞，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的凋亡和死亡。同時(shí)，IL - 2 還可以增強(qiáng) TIL 細(xì)胞表面受體的表達(dá)，提高 TIL 細(xì)胞對(duì)腫瘤抗原的識(shí)別和結(jié)合能力，增強(qiáng)其對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷作用。
維持 TIL 細(xì)胞的存活：在體外培養(yǎng)和擴(kuò)增過(guò)程中，TIL 細(xì)胞會(huì)面臨營(yíng)養(yǎng)缺乏、氧化應(yīng)激等不利因素的影響，容易發(fā)生凋亡和死亡。IL - 2 可以通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡信號(hào)通路，促進(jìn)抗凋亡蛋白的表達(dá)，從而延長(zhǎng) TIL 細(xì)胞的存活時(shí)間，提高細(xì)胞培養(yǎng)的成功率和質(zhì)量。
 
總之，IL - 2 在 TIL 療法中對(duì)于 TIL 細(xì)胞的增殖、活化和存活都起著關(guān)鍵的支持作用，是該療法成功實(shí)施的重要因素之一。
 
IL-2在TIL療法中的局限
盡管IL - 2在TIL療法中發(fā)揮了重要作用，但也存在一些缺點(diǎn)：
系統(tǒng)毒性：在使用IL - 2來(lái)促進(jìn)TIL細(xì)胞增殖和活化的過(guò)程中，由于IL - 2的全身性作用，可能會(huì)引起一系列全身毒性反應(yīng)。例如，可導(dǎo)致血管滲漏綜合征，表現(xiàn)為低血壓、水腫、漿膜腔積液等癥狀。此外，還可能引發(fā)發(fā)熱、寒戰(zhàn)、疲勞、惡心、嘔吐、腹瀉等全身性癥狀，嚴(yán)重情況下可能會(huì)影響患者的生活質(zhì)量，甚至危及生命。比如有些患者在接受高劑量IL - 2治療后，出現(xiàn)了嚴(yán)重的低血壓和全身性水腫，需要住院進(jìn)行支持治療。
 
免疫調(diào)節(jié)失衡：IL - 2不僅可以激活TIL細(xì)胞，還可能對(duì)其他免疫細(xì)胞產(chǎn)生影響，造成免疫調(diào)節(jié)失衡。例如，它可能促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg細(xì)胞）的增殖和活化，而Treg細(xì)胞會(huì)抑制免疫反應(yīng)，從而在一定程度上削弱TIL細(xì)胞的抗腫瘤效果。在某些實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，高劑量的IL - 2雖然增加了TIL細(xì)胞的數(shù)量，但同時(shí)也使Treg細(xì)胞增多，導(dǎo)致腫瘤的抑制效果沒(méi)有達(dá)到預(yù)期。
 
劑量控制困難：要達(dá)到理想的TIL細(xì)胞增殖和活化效果，IL - 2的劑量需要精準(zhǔn)控制。劑量過(guò)低可能無(wú)法有效刺激TIL細(xì)胞增殖和活化；劑量過(guò)高則可能引發(fā)嚴(yán)重的毒副作用。但由于個(gè)體差異和腫瘤微環(huán)境的復(fù)雜性，確定合適的IL - 2劑量具有一定的挑戰(zhàn)性。比如在臨床實(shí)踐中，不同患者對(duì)于相同劑量的IL - 2反應(yīng)差異很大，有些患者需要反復(fù)調(diào)整劑量才能達(dá)到理想效果。
 
逐典高活性偏向性IL-2
逐典生物研發(fā)團(tuán)隊(duì)具有十多年跨國(guó)公司工作經(jīng)驗(yàn)，在蛋白分子結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)方面具有極其豐富的經(jīng)驗(yàn)，曾將多個(gè)蛋白新分子藥物推至臨床階段。逐典生物研發(fā)團(tuán)隊(duì)?wèi){借專有的蛋白設(shè)計(jì)平臺(tái)，開發(fā)出具有偏向性的IL-2，通過(guò)改變與α、β和γ三種不同受體的親和力實(shí)現(xiàn)優(yōu)先高效激活CD8+T細(xì)胞或者高效優(yōu)先激活Treg細(xì)胞。不論通過(guò)展示在免疫細(xì)胞表面，抑或是從人體分離相關(guān)免疫細(xì)胞中使用，偏向型IL-2的使用會(huì)更有效地滿足細(xì)胞藥物研發(fā)需求
 
下面以逐典生物IL-2 AID為例，展示其優(yōu)先激活Treg細(xì)胞的相關(guān)數(shù)據(jù)（其他更多偏向性細(xì)胞因子信息，歡迎聯(lián)系技術(shù)熱線15951985773）。
 
 
圖1. IL-2 AID分子更易使穩(wěn)定表達(dá)有αβγ受體的細(xì)胞增殖
 
 
 
 
圖2. 體外刺激人PBMC結(jié)果顯示，IL-2 AID分子可以優(yōu)先刺激Treg增殖，與IL-2 WT相比，CD8+ T和Treg ED50差值明顯增大
 
【關(guān)于逐典】
 
上海逐典生物科技有限公司，坐落于中國(guó)（上海）自由貿(mào)易試驗(yàn)區(qū)，獲得ISO9001質(zhì)量體系認(rèn)證，是一家從事重組蛋白研發(fā)和銷售的高新科技企業(yè)。
逐典生物始終秉持以客戶為中心的理念，針對(duì)重組蛋白的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)、純化工藝及其穩(wěn)定劑型相關(guān)的多項(xiàng)關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化。專業(yè)定向蛋白變復(fù)性技術(shù)，可將大腸桿菌大量表達(dá)的變性固體蛋白轉(zhuǎn)變成高活性可溶性蛋白。憑借技術(shù)優(yōu)勢(shì)，逐典生物新品研發(fā)周期短且可控性強(qiáng)，為重組蛋白的高質(zhì)高效研發(fā)提供保障，為企業(yè)生產(chǎn)降本增效。
公司自成立以來(lái)成功開發(fā)百余種高活性細(xì)胞因子及多種高活性蛋白酶，覆蓋細(xì)胞培養(yǎng)、病毒純化以及質(zhì)量分析等生物工藝各個(gè)環(huán)節(jié)�？蓮V泛應(yīng)用于科研、醫(yī)藥生產(chǎn)及IVD（體外診斷試劑）等領(lǐng)域，滿足各類用戶所需。