掌握D-螢光素鉀鹽使用方法及應(yīng)用

一. 體外生物發(fā)光檢測

1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成30mg/mL的儲存液 (100-200×) ，混勻。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至0.15-0.3mg/mL的工作液濃度。

3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基。

4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育5-10 min，然后進(jìn)行圖像分析。

二. 體內(nèi)活體成像分析

1）用無菌的DPBS (w/o Mg2+、Ca2+) 配制15 mg/mL的熒光素的儲存液，混勻。

2）用0.2 µm濾膜過濾除菌。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

3）腹腔注射（i.p.），按照150 mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg；

4）注射入體內(nèi)10-15 min（待光信號達(dá)到最強(qiáng)穩(wěn)定平臺期）后進(jìn)行成像分析。

注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線，從而確定最高信號檢測時(shí)間和信號平臺期。

三，逐典D-螢光素鉀鹽優(yōu)勢

1.高純度（HPLC驗(yàn)證純度≥99%)

2.優(yōu)異的生物發(fā)光性能

3.高溶解度（>40mg/ml)

四，應(yīng)用場景

D-熒光素鉀鹽在不同領(lǐng)域具有多種應(yīng)用場景。其中包括蛋白表達(dá)研究、抗腫瘤或抗病毒藥物研究以及mRNA疫苗開發(fā)等。

蛋白表達(dá)研究：將Luc基因插入需要研究的蛋白中，可用于定量目標(biāo)蛋白在實(shí)驗(yàn)動物體內(nèi)的表達(dá)情況。

抗腫瘤或抗病毒藥物：在腫瘤細(xì)胞或病毒中導(dǎo)入Luc基因，建立腫瘤或病毒感染小鼠模型，注射藥物后，通過活體成像技術(shù)觀測腫瘤大小或病毒感染的變化。

mRNA疫苗開發(fā)：在mRNA中插入Luc基因，脂質(zhì)體包裹后注射實(shí)驗(yàn)動物后，可通過活體成像技術(shù)可觀測疫苗的免疫效果。

五，應(yīng)用案例分享