Recilisib是一種輻射防護劑

Recilisib(ON 01210)是一種輻射防護劑，可以激活細胞中AKT和PI3K的活性。

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Recilisib的生物活性

體外研究

Recilisib(最高濃度為50μM)顯示出細胞周期中的正態(tài)分布，且在50μM處S期的細胞數(shù)量略有減少。持續(xù)暴露于Recilisib(100μM)并不會導致細胞死亡。Recilisib處理并不抑制人骨髓細胞的集落形成潛能。Recilisib對所有三種劑量的IR下的人骨髓細胞提供了劑量依賴性的保護。Recilisib在HFL細胞中激活A(yù)KT和GSK3α/β的磷酸化。Recilisib增加了HFL-1細胞和小鼠骨髓細胞對輻射暴露反應(yīng)中的PI3K活性。與放射線聯(lián)合使用的Recilisib處理改變了MAPK信號傳導途徑。

MCE并未獨立確認這些方法的準確性。它們僅供參考。

體內(nèi)研究

Recilisib(500 mg/kg)顯著提高了小鼠原始骨髓髓樣祖細胞恢復(fù)和分化的速度。配合輻射使用的Recilisib減少了小鼠的CFU數(shù)量，但是接受Recilisib治療的小鼠始終保持形成分化菌落的能力。受Recilisib處理的小鼠擁有一個祖細胞群體，該群體永遠不會被輻射暴露完全消耗掉。

實驗參考方法

激酶測定

使用處于指數(shù)增長期的HFL-1或新鮮收獲的小鼠骨髓細胞進行PI3激酶檢測，這些細胞被用越來越高濃度的Recilisib Sodium處理2小時，然后用10 Gy IR輻射。然后將這些細胞返回孵育器中，孵育2至24小時，并在pH 7.5的HEPES裂解液中裂解。使用抗PI3 Kinas多克隆抗體在4°C下對PI-3K進行免疫沉淀2小時。蛋白質(zhì)A/G PLUS-Agarose與免疫沉淀物在4°C下孵育8-16小時，并用兩次pH 7.5的HEPES裂解液和一次激酶緩沖液（20 mM Tris pH 7.5，1mM EGTA，10mM MgCl2，2 mM DTT，0.01%NP-40）清洗得到的免疫沉淀物。L-α-磷脂酰肌醇（12.5 mM）和ATP（10µM）加入激酶緩沖液（每個樣品60µL），并在30°C下孵育30分鐘。通過添加100µL的1N HCl停止反應(yīng)，并通過添加200µL CHCl3/CH3OH（1:1）提取。振蕩提取的樣品，離心，含有磷脂的有機相在27°C下干燥2小時。將干燥的樣品用PI-4-P標準溶液（0.5 mL CHCl3，0.5 mL CH3OH，2.5µL HCl）重懸浮在10µL中，并點樣于TLC板（VWR）。然后將點樣的板子在CHCl3/CH3OH/NH4OH（40:40:15）中進行薄層色譜。然后烘干TLC板并進行自顯影。

細胞試驗

在細胞毒性試驗中，細胞（HPGM中每毫升1.0×10^5個細胞）被用Recilisib Sodium的各種濃度或者無輻射處理的載體進行處理2小時或24小時。然后洗滌細胞并將其接種到使用方格盤的甲基纖維素培養(yǎng)基中。通過使用Olympus IMT-2顯微鏡觀察，確定14天后接種的菌落形成單位(CFUs)的總數(shù)。