Q
Nucleofector技術的基本原理是什么?
A
Nucleofector技術用于原代細胞和難以轉染的細胞系。這是一種基于電轉參數(shù)和細胞類型特異性試劑盒的非病毒轉染方法。使用Nucleofector技術,DNA直接進入細胞核,對于其他底物(如蛋白質、siRNA或miRNA等)Nucleofector技術也能夠提供高效、穩(wěn)健的轉染,同時保持高細胞活力。
Q
為什么Nucleofector技術是瞬時蛋白質生產的理想選擇?
A
對于許多懸浮細胞系,特別是CHO,常規(guī)轉染方法的效率非常有限。
對于蛋白質生產,懸浮細胞比貼壁細胞更受青睞,因為它們更容易培養(yǎng)。與傳統(tǒng)的轉染方法不同,Nucleofector技術為與蛋白質生產相關的懸浮細胞系(包括CHO和HEK293)提供了優(yōu)異的轉染效率和活性,有助于在幾天內產生毫克量。
Q
為什么Nucleofector技術是穩(wěn)定克隆生產蛋白質的理想選擇?
A
由于篩選程序和轉染后對無血清條件的適應,穩(wěn)定克隆的產生通常需要六個月或更長時間。在Nucleofector技術的幫助下,懸浮細胞可以在無血清環(huán)境中直接轉染,這有助于顯著縮短時間。
Q
為什么Nucleofector技術是原代細胞和難以轉染細胞系的理想選擇?
A
Nucleofector技術可將DNA直接轉移到細胞核,這使得基因表達不依賴于細胞分裂。因此,該技術是原代細胞,甚至是神經元等非分裂細胞轉染的理想工具。在細胞系和原代細胞中,在轉染后不久產生基因表達,并且在許多情況下,可以在2-4小時內檢測到超過50%的轉染效率。
Q
試劑盒中陽性對照pmaxGFP質粒表達的GFP蛋白的分子量(MW)是多少?
A
分子量約為27kDa。
Q
為了使Nucleofector技術發(fā)揮作用,需要進行哪些優(yōu)化?
A
不需要進行過多優(yōu)化。因為Lonza提供特定細胞類型的轉染試劑和優(yōu)化的電參數(shù)。這些已經在Nucleofector設備中預先編程。此外,我們的優(yōu)化方案還為您提供了有關細胞培養(yǎng)和處理的建議,以獲得最佳轉染結果。您可以在Lonza官網中找到有關您感興趣的細胞類型的詳細電轉相關信息。
Q
當感興趣的細胞沒有可用的優(yōu)化protocol時,該怎么辦?
A
Lonza不斷為越來越多的原代細胞和細胞系開發(fā)新的優(yōu)化試劑盒和方案。要獲取最新信息,請查看龍沙的網站或聯(lián)系我們。
以上就是Lonza電轉實驗答疑解惑第一彈,后續(xù)小編將陸續(xù)推出更多,希望能幫助各位科研工作者拿捏電轉實驗!