平行反應監(jiān)測（PRM）的原理及應用

平行反應監(jiān)測（Parallel Reaction Monitoring，PRM）是質譜分析中的一種方法，廣泛用于生物分子，特別是蛋白質的定量分析。然而，關于PRM是否屬于絕對定量的問題，往往會引發(fā)疑惑。那么，PRM真的是絕對定量的嗎？在這篇文章中，我們將詳細探討這個問題。

1. 平行反應監(jiān)測（PRM）簡介

PRM是一種質譜技術，其在靶向蛋白質分析中尤其有用。它利用了高分辨質譜儀的精確度，通過選擇特定的前體離子（代表目標蛋白質的特異性肽段），并在碰撞細胞中對其進行分解，然后監(jiān)測所有產生的碎片離子。這樣，通過測量這些碎片離子的強度，可以推斷出目標蛋白質的量。

圖1

2. 絕對定量和相對定量

絕對定量方法需要對樣品中目標分子的確切濃度進行度量，這需要使用一個準確的濃度標準或內標。相對定量則是基于比較，在同一樣品中或者在不同樣品中比較目標分子的豐度。

3. PRM在絕對定量中的應用

PRM本身并不直接提供絕對定量，但當結合適當?shù)膬葮思夹g時，可以實現(xiàn)絕對定量。其中一種常用的內標是穩(wěn)定同位素標記的肽段（如13C、15N標記的肽段）。這種標記的肽段在質譜中的表現(xiàn)與自然豐度的肽段幾乎相同，但由于質量的微小差異，可以在質譜圖上將它們區(qū)分開來。

首先，我們需要知道內標肽段的準確濃度，然后將其添加到樣品中。在質譜分析中，由于內標肽段和樣品中的自然豐度肽段同時被測量，因此可以通過比較它們的峰高或面積來推算出目標蛋白質的絕對濃度。這種方法可以消除實驗過程中的各種變量，如樣品制備、離子化效率等。

因此，盡管PRM本身不是絕對定量技術，但結合適當?shù)膬葮思夹g，PRM可以用于絕對定量。這使得PRM成為了蛋白質組學研究中非常強大的工具，因為它可以精確、可靠地測量目標蛋白質的豐度，從而提供了關于生物系統(tǒng)狀態(tài)的重要信息。