Cocoon® Magsep 磁分選工藝使用指南與應用案例分享
Lonza Cocoon® Platform 作為高靈活性，全封閉全自動化細胞治療生產(chǎn)平臺，目前已經(jīng)在全球范圍內(nèi)布局130臺，并有兩個項目進入臨床II期，助力細胞治療產(chǎn)業(yè)化快速發(fā)展。
目前Cocoon® Platform已經(jīng)推出Cocoon® Platform 2.0并整合了磁分選模塊，進一步加強了Cocoon®的全自動化流程。今天Lonza將為大家詳細介紹Cocoon®二代Magsep 磁選Protocol的使用指南。
01 安裝調(diào)試
· 房間需求：EU GMP Grade B/C，19℃-22℃
· 場地環(huán)境：高度約1.5米操作臺，長0.8米，寬1.2米，承重60kg，臺面光滑水平（Cocoon®需進行水平校準）
· 電力需求：100-240 VAC，50/60Hz，6 Amp（UPS電源最佳）
· 氣體準備：CO2，終端管路CPC 5/32" I.D. x 1/4" O.D.
· 網(wǎng)絡接入
02 試劑耗材
03 工藝流程以及要點
Day0 細胞分選激活
包含步驟：
· Cocoon®外：PBMC分離，磁珠孵育
· Cocoon®內(nèi)：培養(yǎng)基添加，細胞分選，細胞激活培養(yǎng)
初始進入細胞請使用純凈的已進行磁珠孵育的PBMC，如使用手動人工分離的PBMC，可于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)24h去除貼壁雜志細胞后方可進入Cocoon®培養(yǎng)。
請按照磁珠供應商推薦的工藝進行磁珠孵育，強烈推薦磁珠細胞比例為1:1，過多的磁珠會導致細胞的過度激活以及后期磁珠殘留的增加。
Day1 細胞轉(zhuǎn)導
包含步驟：pH校準；病毒轉(zhuǎn)導
Cocoon®可以根據(jù)pH來自動調(diào)整艙體內(nèi)CO2的濃度，同時可以根據(jù)培養(yǎng)體系內(nèi)的溶解氧和pH來自動調(diào)整灌流速率來滿足不同客戶的需求。
Day2 病毒去除
包含步驟：病毒去除
培養(yǎng)室全換液以進行病毒去除。
Day3-8 細胞培養(yǎng)
包含步驟：細胞培養(yǎng)；磁珠去除
分別于Day4，Day7進行第一次以及第二次磁珠去除，強烈建議于Day4進行第一次磁珠去除，過度的細胞激活會影響T細胞的亞群以及影響T細胞在Cocoon®培養(yǎng)室中的增殖。
Day9 細胞收獲
包含步驟：
· Cocoon®內(nèi)：磁珠去除，細胞收獲
· Cocoon®外：細胞洗滌，細胞凍存
于Day9進行細胞收獲，進行第三次磁珠去除并進行洗滌收獲。
Cocoon®可以進行洗滌，但是Cocoon®本身耗材不耐受DMSO，因此如需要在Cocoon®內(nèi)進行細胞洗滌分裝，請使用不含有DMSO的凍存液。
04 應用案例
目前已有中國廣州以及新西蘭客戶使用Cocoon®進行了TLR2 CAR T cells的臨床研究。
CAR結(jié)構(gòu)如下：
與手工生產(chǎn)數(shù)據(jù)相比，Cocoon®在病人和健康人間展現(xiàn)了更穩(wěn)定的陽性率：
同時，相較于手工工藝Cocoon®展現(xiàn)了更加穩(wěn)定的細胞產(chǎn)量和純度：
最后相較手工工藝也展現(xiàn)了類似的CD4/8細胞亞群：
一代Cocoon®與二代Cocoon®在細胞擴增以及細胞活率方面沒有明顯差距：
Cocoon® Platform具有高度靈活性，能順利地幫客戶進行手工工藝的轉(zhuǎn)移和放大生產(chǎn)工作，助力全球細胞治療產(chǎn)業(yè)發(fā)展。
[參考文獻]
Cell & Gene Therapy Insights 2022; 8(1), 97–112
DOI: 10.18609/cgti.2022.027
Magnetic selection for consistent cellular starting material in autologous cell therapy manufacture
