逍鵬小課堂之細胞培養(yǎng)基礎問答

 

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下面跟小編一起進入細胞培養(yǎng)知識小課堂吧~

第一課

歡迎大家來到---細胞培養(yǎng)知識小課堂

細胞培養(yǎng)實驗中用量最多的就是細胞培養(yǎng)基，雖然細胞培養(yǎng)試驗基本技術大同小異，但是每種細胞的培養(yǎng)條件卻相差甚遠。若偏離某種細胞所需的培養(yǎng)條件，則會導致細胞表達不同的表型

因此，在實驗前，需要熟悉自己所使用的細胞系，并在實驗中嚴格遵守所有產品的操作說明。 

在實驗過程中，作為實驗小白，我們應該如何應對相關問題呢？

來，大家看黑板啦~  
 

 首先，我們要如何挑選適合自己細胞生長的培養(yǎng)基呢？

選擇培養(yǎng)基沒有確切的標準，有幾點建議可供參考：

1. 建立某種細胞株所用的培養(yǎng)基應該是培養(yǎng)這種細胞適合的培養(yǎng)基�？梢圆殚� ATCC 或在購買細胞株時咨詢供應商。

2. 根據細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養(yǎng)基。如小鼠細胞株多選 RPMI1640。

3. 其他實驗室慣用的培養(yǎng)基不妨一試，許多培養(yǎng)基可以適合多種細胞。

4. 也可用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞，觀察其生長狀態(tài)，可以用生長曲線、集落形成率等指標判斷，根據實驗室結果選擇最佳培養(yǎng)基，這是最客觀的方法，但比較繁瑣。

如何正確地保存培養(yǎng)基？

普通的培養(yǎng)基放置在 2-8℃ 冰箱避光保存，若已開封建議3周內使用。未開封的培養(yǎng)基，一般可穩(wěn)定保存1年。

培養(yǎng)基中酚紅的作用是什么？導致培養(yǎng)基顏色變化的原因有哪些？

1. 酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為 pH 值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。

2. 培養(yǎng)基顏色變黃，原因有：培養(yǎng)基中細胞代謝產物為酸性，培養(yǎng)瓶受污染，細菌代謝產酸等導致。

3. 培養(yǎng)基顏色偏暗紅色，原因有：培養(yǎng)基保存在 4℃ 冰箱中，培養(yǎng)基內的二氧化碳逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性，而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑酚紅會隨著堿性增加而更偏暗紅。

我感覺自己的培養(yǎng)基污染了，這要怎么進行測試呢？

取 0.1ml 液體培養(yǎng)基涂布到無菌蛋白棟牛肉膏培養(yǎng)基上 37℃ 培養(yǎng) 24h，觀察有無雜菌生長（肉眼即可觀察到）。

如果我的培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？

一旦培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素，建議避光保存在 4℃ 冰箱且在 2 周內用完。因為一些抗生素和血清的基本成分在解凍后就開始降解了。

哇！我的培養(yǎng)基怎么有沉淀了，這是怎么回事？怎么預防處理沉淀？

1. 先判斷培養(yǎng)基是否已經污染，其次，若沉淀為絮狀沉淀則可能是加入血清引起的，此沉淀對細胞培養(yǎng)無影響。若沉淀為結晶，有可能是因為向培養(yǎng)基里加入的輔助試劑降低了培養(yǎng)基的溶解度，使一些無機鹽析出。

2. 可應用離心、過濾的方法去除這些沉淀，盡可能地減少血清凍融次數。

那我什么情況下可以使用不加酚紅的培養(yǎng)基呢？

研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素（特別是雌激素）的作用。為避免固醇類反應，培養(yǎng)細胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基；一些研究人員在做流式細胞檢測時，為了避免酚紅干擾檢測，也使用不加酚紅的培養(yǎng)基。

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