免疫共沉淀反應(yīng)

免疫共沉淀反應(yīng) 
1．  轉(zhuǎn)染后24-48 h 可收獲細(xì)胞，加入適量細(xì)胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30 min,細(xì)胞裂解液于4°C，最大轉(zhuǎn)速離心30 min后取上清；
2． 取少量裂解液以備Western blot分析，剩余裂解液加1μg相應(yīng)的抗體加入到細(xì)胞裂解液，4°C緩慢搖晃孵育過夜；
3． 取10 μl protein A 瓊脂糖珠，用適量裂解緩沖液洗3 次，每次3 000 rpm離心3 min；
4.． 將預(yù)處理過的10μl protein A 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細(xì)胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4 h，使抗體與protein A瓊脂糖珠偶連；
5． 免疫沉淀反應(yīng)后，在4°C 以3,000 rpm 速度離心3 min，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1 ml裂解緩沖液洗3－4次；最后加入15 μl的2×SDS 上樣緩沖液，沸水煮5分鐘；
6． SDS-PAGE，Western blotting或質(zhì)譜儀分析。