肝素親和介質(zhì)選擇及應(yīng)用

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肝素親和介質(zhì) Heparin Affinity Resin

肝素親和介質(zhì)適用于與肝素分子有特異性吸附作用的蛋白分子的分離和純化，例如：凝血因子、抗凝血酶III、生長(zhǎng)因子、干擾素以及脂肪酶等。肝素親和介質(zhì)以瓊脂糖軟膠微球作為基質(zhì),采用惠誠(chéng)生物特有的化學(xué)鍵和技術(shù)固定肝素分子,通過(guò)肝素與抗凝血酶III或具有類(lèi)似結(jié)構(gòu)蛋白分子之間的特異性結(jié)合力實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的分離，上�；菡\(chéng)生物提供肝素親和介質(zhì)，詳情致電惠誠(chéng)生物021-60498804.

肝素親和介質(zhì)具有以下特點(diǎn)：

1.親和力好

2.蛋白活性回收率高

3.化學(xué)穩(wěn)定性好

上�；菡\(chéng)生物肝素親和介質(zhì)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)如下：

一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介

肝素（Heparin）是一種含硫酸酯的酸性多糖，能和抗凝血因子III、凝血酶、類(lèi)凝血酶、人凝血因子IX、XI和VIII，也能和大腸桿菌表達(dá)的人白介素、人前列腺生長(zhǎng)因子、重組人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、軟骨生長(zhǎng)因子、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、重組人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、重組肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子、重組鼠肝素輔因子II、重組人血小板第四因子、重組人內(nèi)皮抑素、重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子等生物大分子結(jié)合，所以肝素親和介質(zhì)可以用于這類(lèi)物質(zhì)的純化。肝素親和層析介質(zhì)以交聯(lián)瓊脂糖為基質(zhì)，采用環(huán)氧活化工藝，將肝素偶聯(lián)到瓊脂糖凝膠上，該填料具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性，配基不易脫落，使用壽命長(zhǎng)，使用方便，應(yīng)用廣泛。

二、產(chǎn)品特性

參數(shù)	指標(biāo)
基質(zhì)	瓊脂糖凝膠微球
配基	Heparin
形狀	球形
介質(zhì)平均粒徑	90 μm (50~160)
配基密度	3.5mg heparin/ml wet gel
動(dòng)態(tài)載量	2mg AT III/ml wet gel
最高流速（25℃）	500 cm/h
最高耐壓	0.3 MPa (3 bar)
pH穩(wěn)定性	4~12（長(zhǎng)時(shí)間）；4~13（短時(shí)間）
保存	4~8 oC（0.05M乙酸鈉+20%乙醇）

三、操作步驟

肝素親和層析介質(zhì)廣泛用于抗凝血因子III、凝血酶、類(lèi)凝血酶、人凝血因子IX、XI和VIII等生物大分子的分離純化。層析操作通常包括裝柱、平衡、進(jìn)料、淋洗、洗脫、再生等步驟。

1.平衡：用5~10CV的平衡緩沖液（20-50mM PB或Tris/HCl，pH 7.4-8.0，可加入0.15M NaCl抑制非特異吸附）平衡層析柱，至流出液電導(dǎo)和pH不變（與平衡液一致）。

2.進(jìn)料：樣品緩沖液應(yīng)盡可能與平衡液一致。固體樣品可用平衡液溶解配制；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋。為了避免堵塞層析柱，樣品應(yīng)經(jīng)離心或微濾處理。進(jìn)料量根據(jù)介質(zhì)的載量和料液中目標(biāo)蛋白的含量計(jì)算。

3.淋洗：上樣完畢后繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線(xiàn)。

4.洗脫：用洗脫緩沖液（20-50mM PB或Tris/HCl+1-2M NaCl，pH7.4-8.0，NaCl濃度需要根據(jù)目標(biāo)蛋白的結(jié)合力進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整）洗脫，收集流出液。可采用線(xiàn)性梯度或階越式梯度洗脫。

5.原位清洗：為了避免不同樣品間的相互干擾，或者當(dāng)介質(zhì)污染比較嚴(yán)重時(shí)（反壓增加），需要對(duì)介質(zhì)進(jìn)行在位清洗。

（1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合的蛋白，可用2~3 CV以上的2M NaCl清洗，并用3 CV以上的純水沖洗。（2）對(duì)沉淀或變性蛋白蛋白，可用0.1M NaOH清洗（1~2h），并用3~10 CV平衡液和3 CV以上的純水沖洗。也可用6M Gua-HCl或8M Urea清洗（0.5~1h）（3）對(duì)疏水性結(jié)合的蛋白，可用0.1~0.5%的非離子去污劑清洗（1~2h），并用3~10 CV的純水沖洗。

其它注意事項(xiàng)：在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。

四、具體應(yīng)用實(shí)例

轉(zhuǎn)基因羊奶中抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）的分離純化

層析柱：2.5 cm × 1.0 cm I.D.，CV=2 mL

樣品：預(yù)處理的轉(zhuǎn)基因羊奶（0.45 µm濾膜過(guò)濾，上樣10 mL）

平衡緩沖液（A）：50 mM Tris/Hcl, pH 7.2

洗脫緩沖液（B）：50 mM Tris/Hcl+1 M NaCl, pH 7.2

流速：1 mL/min