Cycloheximide放線菌酮CHX的作用

瀏覽次數(shù)：759　發(fā)布日期：2024-1-31　來(lái)源：https://www.activeinhibitor.com/yzj/42.html

　　Cycloheximide(Naramycin A)是真核生物蛋白質(zhì)合成的抑制劑，抑制體內(nèi)蛋白質(zhì)合成和RNA合成的IC50值分別為532.5 nM和2880 nM。

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　　Cycloheximide的生物活性

　　體外研究

　　Cycloheximide(CHX)是最常用的用于抑制蛋白質(zhì)合成的實(shí)驗(yàn)室試劑。Cycloheximide已顯示可阻斷真核翻譯的延伸階段。Cycloheximide結(jié)合核糖體并抑制eEF2介導(dǎo)的易位。令人驚訝的是，Cycloheximide允許一個(gè)完整的易位循環(huán)在停止任何進(jìn)一步的延伸之前繼續(xù)進(jìn)行。Cycloheximide據(jù)推測(cè)，Cycloheximide需要E位點(diǎn)結(jié)合的脫酰tRNA才能發(fā)揮活性

　　體內(nèi)研究

　　在用200μA電擊訓(xùn)練之前，小鼠接受30、60或120 mg/kg的Cycloheximide注射。Cycloheximide對(duì)記憶測(cè)試試驗(yàn)的潛伏期有顯著影響(P<0.001)。在鹽水控制中，這種電擊水平導(dǎo)致測(cè)試試驗(yàn)的延遲明顯高于訓(xùn)練中的延遲。注射最低劑量的Cycloheximide測(cè)試，30 mg/kg，導(dǎo)致測(cè)試試驗(yàn)的潛伏期明顯高于鹽水對(duì)照組。接受兩種較高劑量Cycloheximide中任一種的小鼠在測(cè)試試驗(yàn)中的潛伏期與鹽水組相當(dāng)，即在這些條件下較高劑量既不增強(qiáng)也不損害記憶，導(dǎo)致倒U型劑量反應(yīng)曲線用于Cycloheximide增強(qiáng)記憶[2]。當(dāng)在HI后0小時(shí)或6小時(shí)給予環(huán)己酰亞胺時(shí)，梗塞體積通過(guò)三苯基氯化四唑(TTC)對(duì)梗塞區(qū)域的形態(tài)分析測(cè)量，分別顯著減少92%和61%，但如果環(huán)己酰亞胺則顯示梗塞減少趨勢(shì)不顯著與HI對(duì)照組相比，在缺氧缺血(HI)后12小時(shí)給藥，延遲至HI后24小時(shí)給藥未觀察到保護(hù)作用

　　cycloheximide的實(shí)驗(yàn)參考方法

　　細(xì)胞分析

　　為了測(cè)試細(xì)胞增殖，將每孔3000-5000個(gè)細(xì)胞（HeLa，HTB1和HEK 293T細(xì)胞;Jurkat，BT 474，HCC 1395，HCC 1937，HCC 2218和MDA MB231細(xì)胞;MCF 10A）接種在96孔板中并且允許堅(jiān)持過(guò)夜。然后加入以指定濃度（0.1nM-1000μM）溶解在DMSO中的環(huán)己酰亞胺，將細(xì)胞再溫育24小時(shí)。以每孔1μCi加入[3H]-胸苷，并繼續(xù)孵育另外7小時(shí)。用PBS洗滌細(xì)胞兩次，然后用胰蛋白酶消化，然后用Tomtec收集器收集細(xì)胞并結(jié)合GF/C過(guò)濾墊。然后通過(guò)閃爍計(jì)數(shù)測(cè)量胸苷攝取。

　　MCE尚未獨(dú)立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

　　cycloheximide的Animal Administration

　　小鼠

　　在該實(shí)驗(yàn)中使用雄性ICR小鼠（約2個(gè)月大）。環(huán)己酰亞胺Cycloheximide放線菌酮以0（鹽水對(duì)照），30,60或120mg/kg的濃度IP施用。在訓(xùn)練前30分鐘施用環(huán)己酰亞胺注射。120mg/kg劑量通常用于研究小鼠的健忘癥。注意，在大鼠（1-3mg/kg）中遺忘的環(huán)己酰亞胺劑量比在小鼠中低得多，這與大鼠和小鼠的LD50s的類似差異一致。注射后30-60分鐘測(cè)量的環(huán)己酰亞胺劑量為120-150mg/kg導(dǎo)致腦蛋白質(zhì)合成的約95％抑制;30mg/kg的劑量產(chǎn)生約80％的腦蛋白質(zhì)合成抑制。

　　大鼠

　　在甲氧氟烷麻醉下，在7日齡Sprague Dawley大鼠幼仔中進(jìn)行單側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎。頸部在中線切開(kāi)，右頸總動(dòng)脈用4-0絲永久結(jié)扎。每只動(dòng)物的手術(shù)總時(shí)間從未超過(guò)5分鐘。手術(shù)后，將大鼠返回母親進(jìn)行恢復(fù)并喂食2小時(shí)。然后將幼崽置于100分鐘的缺氧期（8％O2,92％N2）中，將它們置于部分浸沒(méi)在溫控水浴中的氣密室中，以使室內(nèi)的環(huán)境溫度保持恒定36°。C。在HI與環(huán)己酰亞胺治療組中，大鼠幼仔在恢復(fù)0,6,12或24小時(shí)時(shí)以0.6mg/kg的劑量腹膜內(nèi)注射環(huán)己酰亞胺，并向HI對(duì)照給予等體積的生理鹽水。組。然后，將大鼠幼崽送回大壩直至犧牲;在HI后48和72小時(shí)分別在深度戊巴比妥麻醉（60mg/kg，腹膜內(nèi)）下進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)和氯化三苯基四氮唑（TTC）獲得全腦組織。

　　MCE尚未獨(dú)立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

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