mRNA 疫苗的優(yōu)點(diǎn)及在癌癥領(lǐng)域的最新研究進(jìn)展

　　2019 年底，新冠病毒席卷全球，疫苗成為全民關(guān)注的焦點(diǎn)，各類創(chuàng)新技術(shù)紛紛助力疫苗的開發(fā)。其中，mRNA 疫苗一鳴驚人，成為新冠疫苗的領(lǐng)跑者，貢獻(xiàn)了舉足輕重的力量。但隨著疫情的全面放開， 人們不禁開始疑惑，mRNA 疫苗會(huì)不會(huì)從此銷聲匿跡了呢？

       

　　核酸疫苗的想法其實(shí)早在幾十年前就已提出，新冠病毒極大地推動(dòng)了 mRNA 疫苗的發(fā)展。2021 年，輝瑞向全球提供了 22 億劑 mRNA 新冠疫苗，銷售額達(dá) 367.8 億美元，占全年收入的 53.44 %。除了對(duì)抗 SARS-CoV-2，mRNA 疫苗還有頗多用處，如預(yù)防巨細(xì)胞病毒 （CMV）、寨卡病毒、呼吸道合胞病毒 （RSV）、流感病毒、狂犬病毒等病原體感染以及開發(fā)預(yù)防性和治療性癌癥疫苗等。

　　圖 1. mRNA 疫苗開發(fā)及臨床靶點(diǎn)

 

　　和傳統(tǒng)疫苗相比，RNA 能夠直接與模式識(shí)別受體 （PRR） 相互作用 （無(wú)需額外的佐劑），驅(qū)動(dòng)體液免疫及細(xì)胞免疫雙重作用機(jī)制，且不會(huì)刺激任何抗因子免疫，安全性更好。

       

　　

　　mRNA 疫苗本身不含有完整的病毒，其主要根據(jù)病毒的基因序列使用體外轉(zhuǎn)錄合成，可快速開發(fā)出新型候選疫苗。通常來(lái)講，mRNA 的體外合成遵循以下幾個(gè)步驟：模板生產(chǎn)、體外轉(zhuǎn)錄、mRNA 加帽、mRNA 加尾、純化/質(zhì)檢。

 

　　其中，體外轉(zhuǎn)錄可以說(shuō)是 mRNA 研究中經(jīng)典的一步，提高加帽 mRNA 得率，減少模板 DNA 的殘留，是體外合成加帽 mRNA 始終追求的。利用含有 T7 啟動(dòng)子序列的 DNA 為模板在 T7 RNA 聚合酶的條件下，以 NTP 為底物合成與模板 DNA 中一條鏈互補(bǔ)的 mRNA，簡(jiǎn)單快速獲得大量的 mRNA 分子，再通過(guò)在 5? 端加上帽子結(jié)構(gòu)和 3? 端加 Poly（A） 尾加強(qiáng) mRNA 的穩(wěn)定性。

　　圖 2. 體外轉(zhuǎn)錄 （IVT） mRNA 生產(chǎn)和裝配過(guò)程

 

 

　　cDNA 序列用于詳細(xì)說(shuō)明轉(zhuǎn)錄載體或 PCR 片段，包括完整的 mRNA 信息和上游 T7 RNA 啟動(dòng)子。

 

 

　　線性化質(zhì)�；� PCR 產(chǎn)品使用 T7 RNA 聚合酶進(jìn)行 IVT-mRNA 生產(chǎn)。在存在 CAP 類似物 （ARCA，Clean-Cap） 的情況下，在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中一步實(shí)現(xiàn) mRNA 加帽，或者在 IVT-mRNA 產(chǎn)生后通過(guò)酶促加帽反應(yīng)分兩步實(shí)現(xiàn)。

 

 

　　純化含有 DNA 模板、雙鏈 RNA （dsRNA） 以及加帽和未加帽的單鏈 RNA （ssRNA） 的反應(yīng)產(chǎn)物。在純化過(guò)程中，用 DNase 處理去除 DNA 模板，將 5' ppp 未加帽的 RNA 去磷酸化為 5' OH RNA，通過(guò) HPLC 純化丟棄 dsRNA，以獲得目標(biāo) mRNA 的純均質(zhì)溶液。

 

 

　　用于高效的細(xì)胞遞送和轉(zhuǎn)錄本的翻譯。其中 mRNA 被包裹在脂質(zhì)納米顆粒核心的內(nèi)部液滴中，既能防止 RNase，又能有效輸送到胞質(zhì)溶膠。

       

　　編碼腫瘤相關(guān)或腫瘤特異性抗原的合成 mRNA 可通過(guò)體外 mRNA 改造的自體樹突細(xì)胞、或通過(guò)配制或非配制的 mRNA 進(jìn)行注射遞送。一些基于 mRNA 的癌癥疫苗治療研究正在進(jìn)行。

 

　　2023 年 4 月，發(fā)表在 Cancer Discov 一篇題為“mRNA Vaccine Slows Melanoma Recurrence”的文章揭示了黑色素瘤疫苗——mRNA-4157 的重磅研究進(jìn)展。mRNA-4157 的臨床 2b 期試驗(yàn) （KEYNOTE-942） 發(fā)現(xiàn)聯(lián)合治療可將黑色素瘤患者在腫瘤完全切除后的復(fù)發(fā)或死亡風(fēng)險(xiǎn)顯著降低 （44%）。該疫苗已經(jīng)于 2023 年 2 月被美國(guó)食品藥品管理局 （FDA） 授予突破性療法認(rèn)定，用于完全切除后的高危黑色素瘤患者的輔助治療。

 

　　同年 5 月 ，發(fā)表在 Nature 雜志上的一項(xiàng)研究表明，個(gè)性化 mRNA 疫苗 Cevumeran  與其他療法 （Atezolizumab 和 mFOLFIRINOX （化療藥物）） 聯(lián)合使用時(shí)，可顯著誘導(dǎo)免疫響應(yīng)，并可能延遲胰腺癌患者的復(fù)發(fā)。

　　圖 3. 個(gè)體化 mRNA 新抗原疫苗的試驗(yàn)設(shè)計(jì)圖

 

　　此外，Huang 等人的研究發(fā)現(xiàn)了開發(fā)抗胰腺癌 （PAAD） mRNA 疫苗中的 6 種有效抗原WNT7A、ADAM9、MET、EFNB2、TPX2 和 TMOD3。同時(shí)，CV9201，一種基于 RNActive? 的癌癥免疫療法，編碼 5 種 NSCLC 抗原。其在臨床 I/IIa 期劑量遞增實(shí)驗(yàn)中對(duì)局部晚期或轉(zhuǎn)移性 NSCLC 患者表現(xiàn)耐受性良好，治療后可觀察到免疫應(yīng)答。

       

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