β-Amyloid (25-35)β-淀粉樣蛋白

　　β-Amyloid β-淀粉樣蛋白（25-35）（Amyloid beta-peptide （25-35））是阿爾茨海默氏淀粉樣蛋白β肽的Aβ（25-35） 片段，在培養(yǎng)細(xì)胞中顯示出神經(jīng)毒性活性。

 

　　MCE 的所有產(chǎn)品僅用作科學(xué)研究或藥證申報(bào)，我們不為任何個(gè)人用途提供產(chǎn)品和服務(wù)

 

　　體外研究

 

　　β-Amyloid（25-35）肽的氨基酸序列為NH2-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-COOH，其中第一個(gè)Gly代表25號(hào)氨基酸，最后一個(gè)Met代表35號(hào)氨基酸。淀粉樣蛋白β肽（25-35）也首次在凝膠狀態(tài)下進(jìn)行了研究。采用振動(dòng)吸收法和ECD法進(jìn)行了對(duì)比研究。還利用振動(dòng)吸收和VCD光譜研究了Aβ（25-35）肽膜的構(gòu)象偏好。淀粉樣蛋白β肽（25-35）誘導(dǎo)離體腦線粒體的凋亡效應(yīng)和蛋氨酸-35的氧化還原狀態(tài)，在誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡途徑和毒性事件中起關(guān)鍵作用。

 

　　β-淀粉樣蛋白聚集指南（以下是我們推薦的方案。本協(xié)議僅提供了一個(gè)指南，應(yīng)根據(jù)您的具體需求進(jìn)行修改）。

 

　　1. 用冷六氟-2-丙醇（HFIP）溶解固體Aβ肽。肽在室溫下孵育至少1小時(shí)，以建立單體化和結(jié)構(gòu)隨機(jī)化。

 

　　2. 通過蒸發(fā)除去HFIP，得到的肽作為膜在-20或-80℃保存。

 

　　3.將得到的膜在5 mM的無水DMSO中溶解，然后渦流稀釋到適當(dāng)?shù)臐舛群途彌_液（無血清和無酚紅培養(yǎng)基）。

 

　　4. 4-8℃陳化48h。樣品14000g, 4-8℃離心10min;可溶性低聚物在上清液中。將上清液稀釋10-200倍進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

 

　　方法因下游應(yīng)用程序而異。

 

　　MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

 

　　體內(nèi)研究

 

　　大鼠腦室內(nèi)注射Aβ25-35肽，隨后每天給藥1次復(fù)方丹參，連續(xù)23 d。采用Morris水迷宮和被動(dòng)回避法監(jiān)測(cè)大鼠的行為。采用Real - time PCR和Western blotting檢測(cè)海馬淀粉樣蛋白前體蛋白（APP）、β-site APP cleaved enzyme-1（BACE1）、早老素-1（PS1）、胰島素降解酶（IDE）和neprilysin（NEP）。阿爾茨海默病（AD）模型組存在空間學(xué)習(xí)和記憶障礙。與AD模型組相比，CDS和多奈哌齊可顯著改善Morris水迷宮和被動(dòng)回避任務(wù)中Aβ25-35肽誘導(dǎo)的記憶障礙（P < 0.05）和被動(dòng)回避任務(wù)（P < 0.01）。

 

　　MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

 

 

　　細(xì)胞試驗(yàn)

 

　　細(xì)胞活力通過改進(jìn)的MTS測(cè)定法確定，該測(cè)定法基于線粒體脫氫酶將四氮唑鹽轉(zhuǎn)化為分光光度法在490 nm可測(cè)量的甲醛產(chǎn)物。將PC12細(xì)胞以10 000個(gè)細(xì)胞/孔的密度鍍于96孔板中，在完全培養(yǎng)基中保持16小時(shí)。然后用還原、氧化和去甲亮氨酸取代的蛋氨酸-35 （10 μM）作為100%細(xì)胞死亡的陽性對(duì)照，在不存在（對(duì)照）和存在40 μM Aβ（31-35）和Aβ（25-35）的條件下培養(yǎng)細(xì)胞。肽孵育48 h后，每孔加入20 μL MTS試劑（2.0 mg/mL）。然后將細(xì)胞在37°C的5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30-45分鐘。加入25 μL 10%的SDS停止反應(yīng)。用微孔板讀取器在490 nm處讀取。每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)都是通過三孔分析獲得的。

 

　　MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

 

　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

　　大鼠

 

　　選用雄性Sprague-Dawley大鼠54只（2月齡，300-350 g）。淀粉樣蛋白β肽（25-35）以1mg /mL的濃度溶解在無菌蒸餾水中作為貯存液。以1 μL/min的速率向雙側(cè)腦側(cè)腦室注入5 μL/側(cè)的無菌蒸餾水（對(duì)照），聚集a β25-35 （2 μL/ μL）；針頭放置5分鐘，然后取出針頭，將大鼠放在溫暖的墊子上，直到喚醒它們。為確定a - β25-35處理大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用，將a - β25-35處理大鼠分別給予不同劑量的CDS和多奈哌齊治療，每天1次，連續(xù)23天（包括行為測(cè)試持續(xù)時(shí)間）。采用Morris水迷宮和步進(jìn)被動(dòng)回避任務(wù)，研究CDS對(duì)a β25-35誘導(dǎo)的記憶障礙的影響。將所有大鼠隨機(jī)分為6組：（a）載體1 （a β25-35）+載體2 （cd和多奈哌齊），（b）a β25-35+載體2（c） a β25-35+CDS （130 mg/kg）， （d） a β25-35+CDS （260 mg/kg），（e）a β25-35+CDS （520 mg/kg），（f） a β25-35+多奈哌齊（0.5 mg/kg）。大鼠腦室微輸注Aβ25-35 （10 μg/側(cè)）或其載藥后第1天，分別給予CDS或多奈哌齊或載藥2，每天1次，連續(xù)14天，Morris水迷宮開始前進(jìn)行被動(dòng)回避任務(wù)。

 

　　MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。