Scale-X™ 生物反應(yīng)器的種子擴(kuò)增強(qiáng)化

Scale-X™生物反應(yīng)器的種子擴(kuò)增強(qiáng)化
優(yōu)化種子培養(yǎng)策略，更快，更低成本的擴(kuò)大, 實(shí)現(xiàn)細(xì)胞收獲

應(yīng)用筆記
Thomas Robert¹, Jean-Christophe Drugmand¹, Antoine Hubert¹, Tania Pereira Chilima¹
1 Univercells Technologies

簡介
長期以來，貼壁細(xì)胞培養(yǎng)平臺(tái)的使用一直被視為生產(chǎn)疫苗和基因療法的金標(biāo)準(zhǔn)。在上市速度是關(guān)鍵的領(lǐng)域，這些技術(shù)相對(duì)容易采用的優(yōu)勢(shì)可以帶來顯著的好處。然而，使用塑料培養(yǎng)容器等傳統(tǒng)貼壁技術(shù)缺乏可放大性，使其成為晚期臨床或商業(yè)規(guī)模生產(chǎn)成本高昂的選擇⁽¹⁾。

固定床生物反應(yīng)器可以為基于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)的病毒生產(chǎn)提供可放大且強(qiáng)化的替代方案，從而應(yīng)對(duì)上述挑戰(zhàn)。scale-X™ 結(jié)構(gòu)化卷膜固定床生物反應(yīng)器有多種尺寸可供選擇，包括 scale-X hydro、carbo和nitro型號(hào)（可用于細(xì)胞生長的表面積分別為 2.4 m²、10-30 m²和200-600 m²）支持產(chǎn)品開發(fā)、臨床和商業(yè)化生產(chǎn)⁽²⁾。scale-X 生物反應(yīng)器的設(shè)計(jì)范圍旨在不同規(guī)模條件下保持相同的微環(huán)境，其已被證明可以顯著提高各種細(xì)胞病毒產(chǎn)品的細(xì)胞密度和特異性生產(chǎn)率^(3-6)。Univercells Technologies 最大的生物反應(yīng)器 scale-X nitro 200 和 600 型號(hào)在 NevoLine™ Upstream 平臺(tái)內(nèi)運(yùn)行，該平臺(tái)集成了上游和中游工藝步驟，從而提供了減少占地面積和端到端自動(dòng)化的額外好處 ⁽⁷⁾。

雖然與病毒生產(chǎn)強(qiáng)化相關(guān)的好處是顯著的，但它們并沒有消除與大規(guī)模貼壁工藝相關(guān)的關(guān)鍵瓶頸：種子擴(kuò)增。為 scale-X nitro 600 等生物反應(yīng)器生產(chǎn)必要的細(xì)胞接種液需要多個(gè)擴(kuò)增步驟，通常在塑料培養(yǎng)容器中進(jìn)行（圖 1），這會(huì)產(chǎn)生巨大的成本并增加操作次數(shù)，從而與操作員相關(guān)的錯(cuò)誤的可能性更高。認(rèn)識(shí)到這一關(guān)鍵挑戰(zhàn)，Univercells Technologies 設(shè)計(jì)了一種解決方案，其能夠通過酶和機(jī)械作用的組合從 scale-X 固定床收獲細(xì)胞，其原理與當(dāng)前基于塑料培養(yǎng)容器的方法相似。機(jī)械作用是通過一種符合 GMP 的新型細(xì)胞收獲模塊提供的，該模塊設(shè)計(jì)與 scale-X carbo 系統(tǒng)集成（圖 2）。這將有效地使 scale-X carbo生物反應(yīng)器能夠用作大規(guī)模貼壁細(xì)胞工藝的種子擴(kuò)增培養(yǎng)強(qiáng)化解決方案。

本應(yīng)用筆記將詳細(xì)介紹利用 scale-X carbo生物反應(yīng)器作為 scale-X nitro生物反應(yīng)器種子培養(yǎng)強(qiáng)化解決方案的可行性。為此，使用 scale-X hydro (2.4 m²) 測(cè)試了細(xì)胞分離方案，并放大到 carbo 10 和 30 生物反應(yīng)器。實(shí)驗(yàn)研究了從固定床分離貼壁細(xì)胞的能力，以及收獲細(xì)胞的活性及其分離后的生長曲線和表型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與詳細(xì)的成本模型相結(jié)合，以評(píng)估種子擴(kuò)增培養(yǎng)強(qiáng)化的經(jīng)濟(jì)影響。
  上圖描述了使用塑料培養(yǎng)容器（T 瓶和多層容器）制備 600 m² 固定床生物反應(yīng)器接種液所需的連續(xù)步驟。假設(shè)：1）塑料培養(yǎng)容器的接種密度為 3x104，大規(guī)模 nitro 600 生物反應(yīng)器的接種密度為 1x104，2）塑料培養(yǎng)容器的收獲產(chǎn)量為 2x105 cells/cm²，3）每個(gè)多層容器 (MT) 表面積為632 cm²。
  scale-X carbo收獲模塊的概念示意圖。左：scale-X carbo 控制器（用于 GMP 和非 GMP 細(xì)胞培養(yǎng)的商業(yè)化產(chǎn)品）。右圖：概念細(xì)胞收獲模塊（*現(xiàn)在的前端開發(fā)）。
 
 
材料和方法

細(xì)胞培養(yǎng)材料和條件

來自凍存細(xì)胞庫（18H003，ECACC）的貼壁HEK293 細(xì)胞用于所有實(shí)驗(yàn)。在添加有 5% 胎牛血清的DMEM（4.5 g/L 葡萄糖）中進(jìn)行 T 瓶、多層培養(yǎng)容器和生物反應(yīng)器培養(yǎng)。在生物反應(yīng)器中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)之前，將細(xì)胞在 T 瓶和多層容器中預(yù)培養(yǎng)達(dá)到所需的接種液。每3至4天進(jìn)行一次傳代。

生物反應(yīng)器培養(yǎng)

在表 1 中詳述的條件下，將細(xì)胞接種在 scale-X hydro、carbo 10 和 30 生物反應(yīng)器中，在開始細(xì)胞生長期之前，這些反應(yīng)器以批次模式保持 4 小時(shí)，以促進(jìn)細(xì)胞粘附。培養(yǎng)基和固定床采樣載體的每日樣品分別通過葡萄糖和乳酸測(cè)量以及直接細(xì)胞計(jì)數(shù)用于評(píng)估細(xì)胞生長。
   
細(xì)胞收獲模塊

在本研究中，目前正在申請(qǐng)專利的開發(fā)中專用收獲模塊的原型被用于促進(jìn)酶孵育后的細(xì)胞分離。收獲模塊由一個(gè)連接到平臺(tái)生物反應(yīng)器以產(chǎn)生機(jī)械作用（低振幅和高頻振動(dòng)）的裝置組成（圖 2）。

生物反應(yīng)器的細(xì)胞收獲液

在擴(kuò)增 4 到 6 天后，從生物反應(yīng)器中進(jìn)行收獲。在收獲之前，清空生物反應(yīng)器并用 37°C 預(yù)熱的、含有 5 mM EDTA 的 DPBS 溶液 (DPBS-EDTA) 沖洗 2-5 次（取決于生物反應(yīng)器型號(hào)）。隨后，將 37°C 預(yù)熱的分離溶液添加到生物反應(yīng)器中，然后在攪拌（固定床內(nèi)的線速度為 0.5 cm/s）和溫度控制（37°C）條件下孵育 20-25 min。對(duì)于本研究，使用 Accumax™ 酶溶液（Innovative Cell Technologies），1X或在 DPBS-EDTA 中1:3 稀釋。在酶孵育后，生物反應(yīng)器移至收獲模塊進(jìn)行振動(dòng)處理，同時(shí)容器排液。在某些情況下，在第一次收獲之后，用酶溶液進(jìn)行多次沖洗。在所有情況下，收獲后，生物反應(yīng)器用 DPBS-EDTA 沖洗 1-5 次。在一些或所有沖洗步驟期間施加振動(dòng)。在收獲過程的各個(gè)步驟中采集固定床載體和上清液樣品，以確定收獲效率和細(xì)胞活性。細(xì)胞收獲方案的概況如圖 3 所示。

細(xì)胞數(shù)量檢測(cè)

使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器通過臺(tái)盼藍(lán)染料排除法測(cè)量收獲細(xì)胞中的細(xì)胞密度和活性。通過細(xì)胞裂解（scale-X 細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒，Univercells Technologies）并進(jìn)行結(jié)晶紫染色和用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)細(xì)胞核，進(jìn)行采樣載體的生物量評(píng)估。固定床纖維上的細(xì)胞核計(jì)數(shù)用于估計(jì)生物反應(yīng)器內(nèi)的總細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞收獲后，拆解生物反應(yīng)器，從代表性位置取出固定床的一部分，以評(píng)估固定床上剩余的細(xì)胞密度。

再接種實(shí)驗(yàn)

從所有生物反應(yīng)器收獲的細(xì)胞接種在 T 瓶中，以評(píng)估第一次傳代時(shí)的再接種效率、細(xì)胞形態(tài)、活性和細(xì)胞回收。與從塑料培養(yǎng)容器中收獲的對(duì)照細(xì)胞相比，評(píng)估了種群倍增時(shí)間 (PDT值) 和細(xì)胞形態(tài)。此外，從一個(gè)hydro (#5) 和一個(gè)carbo 10 (#2) 生物反應(yīng)器中收獲的細(xì)胞被用于接種新的hydro生物反應(yīng)器，以為“固定床到固定床”接種提供概念驗(yàn)證。使用固定床收獲細(xì)胞的接種條件如前所述。

成本建模

為了評(píng)估種子擴(kuò)增強(qiáng)化的經(jīng)濟(jì)影響，使用 BioSolve Process 軟件（Biopharm Services Limited，英國）進(jìn)行了成本估算。該模型旨在比較兩種情況：僅使用塑料培養(yǎng)瓶和多層細(xì)胞堆棧的傳統(tǒng)種子擴(kuò)增鏈（如圖 1 所示），或通過一個(gè) scale-X carbo 30 生物反應(yīng)器步驟替換最后兩個(gè)擴(kuò)增步驟的等效工藝。該模型使用以下主要假設(shè)：

1. 600 m² 生物反應(yīng)器的目標(biāo)接種液為1x104 cells/cm²（總共 600 億細(xì)胞）；
2. 所有培養(yǎng)瓶和多層容器的接種密度為 3x104cells/cm²，scale-X carbo 30 生物反應(yīng)器的接種密度為 1x104 cells/cm²；
3. 所有培養(yǎng)瓶和多層容器步驟在B級(jí)潔凈室進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；
4. 所有生物反應(yīng)器步驟在C級(jí)潔凈室進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；
5. 對(duì)于培養(yǎng)容器和 scale-X carbo生物反應(yīng)器，收獲細(xì)胞產(chǎn)量為 2x105 cells/cm²。
 
假設(shè)每年 25 個(gè)批次，按批次或每年計(jì)算產(chǎn)出。
  細(xì)胞在 scale-X 生物反應(yīng)器中擴(kuò)增 4-6 天 (1)。在收獲當(dāng)天，沖洗生物反應(yīng)器 (2)，然后用酶溶液充滿并孵育 20-25 min (3)。隨后，將生物反應(yīng)器轉(zhuǎn)移到收獲模塊，同時(shí)施加振動(dòng)和排液(4)。最后，進(jìn)行沖洗，以進(jìn)行細(xì)胞回收 (5)。步驟 1-3 使用安裝在 scale-X hydro/carbo控制器上的生物反應(yīng)器進(jìn)行。對(duì)于步驟 4-5，這些生物反應(yīng)器轉(zhuǎn)移到收獲模塊。
 
 
結(jié)果

細(xì)胞收獲效率

本文中描述的所有實(shí)驗(yàn)均使用未稀釋或 1:3稀釋的 Accumax 進(jìn)行，因?yàn)槌醪窖芯恳汛_定與 TryPLE 相比，其性能有所提高（數(shù)據(jù)未顯示）。用 Accumax 孵育之后進(jìn)行收獲步驟以及隨后的多個(gè)沖洗步驟。對(duì)不同收獲方法的評(píng)估表明，一個(gè)收獲循環(huán)后至少 2 個(gè)沖洗循環(huán)，同時(shí)結(jié)合收獲模塊的振動(dòng)，在回收細(xì)胞方面最有效（數(shù)據(jù)未顯示）。在所有實(shí)驗(yàn)中，對(duì)收獲前后采樣載體的分析表明，>90% 的細(xì)胞從固定床基質(zhì)中分離出來（表 2）�？偟膩碚f，可以從 scale-X hydro生物反應(yīng)器中以單細(xì)胞懸液的形式收獲 2.7 到 5.1x109 細(xì)胞。此外，可以在對(duì)數(shù)期中期（2-3x105cells/cm²）以及接近融合期（4-5x105 cells/cm²）從生物反應(yīng)器中收獲細(xì)胞，這表明在收獲時(shí)優(yōu)化細(xì)胞數(shù)量對(duì)于實(shí)現(xiàn)最高的收獲產(chǎn)量至關(guān)重要。塑料培養(yǎng)容器中的細(xì)胞收獲通常以 2x105 cells/cm² 的細(xì)胞密度進(jìn)行，這突顯了固定床生物反應(yīng)器能夠以更高密度收獲細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)。

規(guī)模放大至carbo 10 和 30 生物反應(yīng)器

在hydro規(guī)模的概念驗(yàn)證和優(yōu)化之后，進(jìn)行了額外的細(xì)胞收獲實(shí)驗(yàn)，以研究收獲性能的可放大性以及 scale-X carbo 10 (n=2) 和 30 (n=1) 規(guī)模。在所有3次收獲中，> 98% 的細(xì)胞從固定床基質(zhì)中分離出來。此外，從 scale-X carbo 30 中以單細(xì)胞懸液的形式收獲了多達(dá) 5.2x1010細(xì)胞（表 2），因此提供了足夠的細(xì)胞，可以 8.6x10³ cells/cm²接種 scale-X nitro 600。此外，在hydro規(guī)模下可以觀察到高達(dá) 2.1x109 cells/m² 的細(xì)胞產(chǎn)量，如果將其轉(zhuǎn)移至carbo 30，則可能以 1x104 cells/cm² 的密度接種 nitro 600。  
細(xì)胞活性和再接種

在本研究進(jìn)行的所有實(shí)驗(yàn)中，收獲的細(xì)胞都表現(xiàn)出高活性（84% 到 96% 之間）（表 2）。用從每個(gè)生物反應(yīng)器收獲的細(xì)胞進(jìn)行再接種實(shí)驗(yàn)。這些實(shí)驗(yàn)是成功的，因?yàn)閷?shí)現(xiàn)了 29-37 小時(shí)的 PDT（與 T 瓶傳代對(duì)照細(xì)胞的29-39 小時(shí)相比）（圖 4）。此外，從 scale-X hydro中收獲的細(xì)胞（表 2 中的 Hydro #4）也用于接種第二個(gè) Hydro（表 2 中的 Hydro #5），其中觀察到了目標(biāo)細(xì)胞生長（圖 4）。然后從第二個(gè)hydro中收獲細(xì)胞，為“固定床到固定床”接種提供概念驗(yàn)證。這一概念也在carbo規(guī)模（第二個(gè)carbo運(yùn)行）中得到驗(yàn)證，其中carbo生物反應(yīng)器使用從hydro生物反應(yīng)器（未顯示）收獲的細(xì)胞進(jìn)行接種。

由于這些固定床到固定床傳代旨在研究用于接種 scale-X nitro 600 生物反應(yīng)器的條件，因此評(píng)估了收獲的細(xì)胞懸液中的殘留酶濃度和細(xì)胞聚集。即使在沒有額外的漂洗或濃縮步驟的情況下，這些參數(shù)也足夠低，不會(huì)干擾細(xì)胞從另一個(gè)固定床收獲后附著在固定床上的能力。 A)從所有生物反應(yīng)器運(yùn)行中收獲的細(xì)胞被重新接種在 T 瓶中，用于生長曲線和形態(tài)評(píng)估。顯示了從固定床生物反應(yīng)器收獲的細(xì)胞（左）以及從 T 瓶中收獲的對(duì)照細(xì)胞（右）在重新接種后第 3 天的顯微照片。B）從一個(gè)scale-X hydro生物反應(yīng)器（#4）收獲的細(xì)胞用于接種第二個(gè)hydro生物反應(yīng)器（#5）。圖中顯示了兩次連續(xù)運(yùn)行中細(xì)胞密度（左軸）和代謝物乳酸和葡萄糖濃度（右軸）的變化趨勢(shì)。箭頭表示收獲和重新接種到第二個(gè)生物反應(yīng)器的時(shí)間。
 
用于大規(guī)模貼壁生產(chǎn)的種子擴(kuò)增鏈的工藝經(jīng)濟(jì)性

研究進(jìn)行了工藝經(jīng)濟(jì)性分析，以評(píng)估用于 scale-X nitro 600 生物反應(yīng)器的種子培養(yǎng)強(qiáng)化的經(jīng)濟(jì)效益。該模型旨在對(duì)僅使用培養(yǎng)瓶和多層細(xì)胞堆棧的種子擴(kuò)增鏈與通過一個(gè) scale-X carbo 30 生物反應(yīng)器步驟替換最后兩個(gè)擴(kuò)增步驟的等效工藝進(jìn)行比較。

如圖 5 所示，結(jié)果表明，當(dāng)使用 scale-X carbo 30 生物反應(yīng)器替換多層培養(yǎng)容器步驟時(shí)，主要成本驅(qū)動(dòng)類別顯著節(jié)省。與工廠、勞動(dòng)力和材料成本相關(guān)的節(jié)省分別達(dá)到 21%、32% 和 40%。此外，與傳統(tǒng)的多層容器相比，使用 scale-X carbo生物反應(yīng)器還可以將種子擴(kuò)增步驟的數(shù)量減少 1 個(gè)（5 步 vs. 塑料培養(yǎng)容器的 6 步），同時(shí)降低無菌風(fēng)險(xiǎn)并提高過程控制。

上述優(yōu)勢(shì)的一個(gè)關(guān)鍵因素在于，scale-X 生物反應(yīng)器可以使用較低的接種密度（1x104 cells/cm² vs. 多層容器的3x104 cells/cm²）進(jìn)行接種。此外，使用封閉的自動(dòng)化系統(tǒng)可以在 C 級(jí)房間中進(jìn)行操作，從而將 B 級(jí)區(qū)域所需的面積減少 41%（未顯示）�？偠�言之，這些結(jié)果突顯了與大規(guī)模貼壁生物反應(yīng)器的種子擴(kuò)增制備自動(dòng)化相關(guān)的顯著經(jīng)濟(jì)效益。
  對(duì)使用塑料培養(yǎng)容器和使用 scale-X carbo 30、以 1x104 cells/cm²接種 600 m² 固定床生物反應(yīng)器的工藝進(jìn)行了比較，計(jì)算了整體成本估算。結(jié)果僅包括種子擴(kuò)增階段的成本。本研究未涵蓋連續(xù)單元操作的成本。使用的關(guān)鍵假設(shè)在材料和方法部分中有詳細(xì)說明。
 
 
討論和總結(jié)

本文詳細(xì)介紹了評(píng)估使用 scale-X 生物反應(yīng)器進(jìn)行種子擴(kuò)增強(qiáng)化的可行性和可放大性的一系列實(shí)驗(yàn)。該研究表明，在多個(gè)生物反應(yīng)器規(guī)模（從 scale-X hydro 到 carbo 10 和 carbo 30）成功地實(shí)現(xiàn)了 >90% 的分離效率。收獲方法遵循塑料培養(yǎng)容器的既定工藝，先進(jìn)行酶處理，然后通過機(jī)械作用，促進(jìn)細(xì)胞分離。這項(xiàng)研究的成功歸功于技術(shù)設(shè)計(jì)本身，因?yàn)?scale-X 生物反應(yīng)器提供了結(jié)構(gòu)化固定床設(shè)計(jì)，有助于分離后的細(xì)胞收獲，同時(shí)仍保持高壓實(shí)度（每單位體積的表面積）以實(shí)現(xiàn)高細(xì)胞密度。此外，這種結(jié)構(gòu)化的固定床設(shè)計(jì)在從hydro到carbo規(guī)模的放大研究中也發(fā)揮了重要作用，因?yàn)樗�能夠跨�?guī)模維持相同的微環(huán)境。

收獲的細(xì)胞也顯示出了 > 90% 的活性，并且在再接種實(shí)驗(yàn)中，它們的生長動(dòng)力學(xué)與對(duì)照條件相當(dāng)，即使接種在另一個(gè)固定床生物反應(yīng)器中時(shí)，這表明在固定床中時(shí)，細(xì)胞經(jīng)歷與在塑料容器中相似的微環(huán)境，而又受益于生物反應(yīng)器可以提供的額外過程控制（pH、DO 和溫度）。數(shù)據(jù)表明，從單個(gè)scale-X carbo 30 收獲細(xì)胞可以產(chǎn)生所需的接種液，以 1x104 cells/cm²接種大規(guī)模固定床生物反應(yīng)器，例如 scale-X nitro 600。

雖然收獲方案在本研究測(cè)試的條件下是有效的，但可能需要針對(duì)特定工藝的優(yōu)化，以達(dá)到各種配置中所需的接種要求（而各種細(xì)胞特性、類型不一，這數(shù)據(jù)只能供參考）。需要優(yōu)化的參數(shù)可能包括振動(dòng)的頻率和/或持續(xù)時(shí)間、酶類型、濃度和孵育時(shí)間，或沖洗步驟的數(shù)量。我們預(yù)計(jì)，基于這種優(yōu)化，目前的細(xì)胞收獲解決方案可能與廣泛的應(yīng)用兼容。

成本建模研究突顯了使用 scale-X 生物反應(yīng)器實(shí)現(xiàn)種子擴(kuò)增自動(dòng)化所帶來的顯著節(jié)省。該模型強(qiáng)調(diào)了工廠、材料和勞動(dòng)力成本的降低。此外，在最后的種子培養(yǎng)步驟中實(shí)施 scale-X carbo生物反應(yīng)器可以通過使用封閉的自動(dòng)化生物反應(yīng)器降低無菌風(fēng)險(xiǎn)，從而降低這一關(guān)鍵工藝的風(fēng)險(xiǎn)。除了成本和風(fēng)險(xiǎn)之外，使用 scale-X carbo生物反應(yīng)器強(qiáng)化種子培養(yǎng)還將減少液體和固體廢物。

本研究是使用目前正在申請(qǐng)專利的開發(fā)中專用收獲模塊的原型進(jìn)行的。這個(gè)新的附加模塊設(shè)計(jì)用于在 scale-X carbo控制系統(tǒng)中完全集成，提供有助于符合 GMP 要求的自動(dòng)化和可追溯性水平。與這種新型系統(tǒng)兼容的專用一次性耗材將實(shí)現(xiàn)具有成本效益的細(xì)胞擴(kuò)增和收獲。本應(yīng)用筆記中顯示的數(shù)據(jù)展示了這種新型收獲模塊如何應(yīng)對(duì)用于病毒生產(chǎn)的種子培養(yǎng)中重大挑戰(zhàn)。
 
 
參考文獻(xiàn)：

1. R. Baghirzade, Adherent versus suspension based platforms: what is the near future of viral vector manufacturing? Cell Gene Ther. Insights. 7, 1365–1371 (2021).
2. T. Pereira Chilima, Innovative fixed-bed bioreactors unify adherent & suspension processing. Univercells Technol. (2021).
3. D. M. Berrie, R. C. Waters, C. Montoya, A. Chatel, E. M. Vela,Development of a high-yield live-virus vaccine production platform using a novel fixed-bed bioreactor. Vaccine. 38, 3639–3645 (2020).
4. A. Chatel, Y. Ghislain, P. Puri, T. Zijdemans, “Scalable Rubella production in scale-X™ bioreactor with MRC-5 cells: Process optimization and scale-up from static flask to scale-X bioreactor with 30 m2 cell growth surface” (2021).
5. R. Carvalho, T. P. Chilima, C. Meeüs, E. Gateau, M. Ferraiuolo, A. Noto, “Suspension-based viral vector production in scale-™ fixed-bed bioreactor Shake flask process transferred in a scale-X hydro fixed-bed bioreactor for Adenovirus production with HEK293 cells adapted to suspension.” (2021).
6. J.-C. Drugmand, A. Chatel, J. Castillo, Y. Dohogne, M. Gras, F. Collignon, S. Kumano, H. Shiomi, scale-X™ bioreactor for viral vector production: Proof of concept for scalable HEK293 cell growth and adenovirus production, (2020)
7. Univercells Technologies, The NevoLine™ Upstream platform -Intensified an automated virus manufacturing (2022), (available at https://www.univercellstech.com/products/nevolineupstream/).
 
 
scale-X™ carbo固定床生物反應(yīng)器