圖1. BLBS原理
進一步,作者將BSLB上的tSV洗脫下來,并利用NanoFCM對tSV和細胞上清獲得的EVs進行綜合表征和對比。發(fā)現(xiàn)tSV顆粒大小在82.13± 0.75nm,而EVs的粒徑為65± 25nm,明顯小于tSV的粒徑大小。用NanoFCM的Exo粒徑標準品(含68, 91, 113, 155 nm四種尺寸的SiO2球),對EVs和tSV的粒徑進行分群,發(fā)現(xiàn)與EVs相比,tSV中大于113nm和155nm的顆粒所占比例更高(圖2-d);tSV中TCR、CD40L、CD81陽性的tSV顆粒粒徑顯著大于對應的EVs陽性的顆粒(圖2-e)。
圖2. tSV和EVs顆粒大小亞群分類
進一步地,對tSV和EVs進行CD81和TCRαβ雙標,發(fā)現(xiàn)tSV中兩種標志物雙陽的比例高于EVs,且TCR陽性的tSV粒徑也顯著大于TCR陽性的EVs(圖3)。后續(xù)作者研究發(fā)現(xiàn)不同種類的T細胞來源的tSV內容物具有明顯區(qū)別;tSV比EV攜帶更多的RNA結合蛋白和特有的microRNA等,感興趣的讀者可以閱讀原文進行了解?偟膩碚f作者提出了珠狀脂質雙分子層(BSLB)作為一種多功能的合成APCs來捕獲、表征和促進對tSV生物發(fā)生的理解,開發(fā)了一種免疫細胞間信息傳遞和交流研究的新方法。
圖3. tSV和EVs功能亞群分析
文章中利用NanoFCM對tSV和EVs的亞群進行精細分類,根據(jù)顆粒的大小將tSV和EVs分成四個不同大小的亞群,通過抗體標記,可對tSV和EVs 功能亞群進一步精細研究。利用NanoFCM單顆粒水平和超高分辨率的優(yōu)勢,可對tSV的不同亞群進行精細分類和研究,有望加快研究者對tSV的精細化研究進程!
參考文獻
Céspedes P F, Jainarayanan A, Fernández-Messina L, et al. T-cell trans-synaptic vesicles are distinct and carry greater effector content than constitutive extracellular vesicles[J]. Nature communications, 2022, 13(1): 3460.