ELISPOT酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)系統(tǒng)的配置與使用指南

酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)，即ELISPOT技術(shù)，是被用于測定分泌特異性抗體或細胞因子的單個細胞對特異性抗原免疫應(yīng)答能力的細胞免疫學技術(shù)。它集高靈敏度、高通量、單細胞水平、功能性檢測等優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于疫苗免疫原性的效價評估、細胞治療的效價評估、基因治療的毒性評估、傳染性疾病/自身免疫性疾病的診斷和療效評估、以及腫瘤治療的療效評估、器官移植免疫排斥的研究、以及基礎(chǔ)免疫學等的研究中。

ELISPOT技術(shù)和ELISA技術(shù)都是基于雙抗夾心法，但是ELISPOT技術(shù)是對單個細胞的功能研究，在整個ELISPOT流程中加入了細胞培養(yǎng)的過程以及斑點分析的流程，這就使整個ELISPOT操作和分析變得復(fù)雜起來。為了確保實驗操作和分析的客觀性，以及實驗結(jié)果的一致性和可重復(fù)性，必須建立一套標準化的流程，包括實驗操作的標準化和實驗人員的專業(yè)培訓；樣本制備和處理過程的標準化，結(jié)果和數(shù)據(jù)分析流程的標準化等。
作為最早在國內(nèi)引入ELISPOT技術(shù)的生物公司，為了在國內(nèi)普及ELISPOT技術(shù)，達科為和國內(nèi)外多位ELISPOT專家以及多家ELISPOT試劑和儀器廠家合作，并針對ELISPOT技術(shù)標準化流程方面自主開發(fā)了一系列產(chǎn)品。是以，達科為可以說是當之無愧的ELISPOT專家。
 

1．樣本制備
樣本制備中，細胞狀態(tài)（細胞分離、細胞凍存）、細胞培養(yǎng)（培養(yǎng)基有無血清）、細胞數(shù)量和活率對ELISPOT實驗都有一定程度的影響。
1.1 細胞分離
ELISPOT檢測的是細胞免疫功能，在細胞分離過程中，需要保持細胞存活率，確保細胞功能不受改變。
 

不同脾細胞分離方法對ELISPOT檢測的影響（達科為數(shù)據(jù)）
 

如上圖，傳統(tǒng)的紅細胞裂解法在紅細胞裂解的過程中，可能導致不同程度的白細胞損傷，進而影響細胞狀態(tài)；達科為“達優(yōu)”品牌分離液專為ELISPOT技術(shù)開發(fā)安全無毒，確保高純度淋巴細胞的同時，確保細胞的高活率。

 
1.2 培養(yǎng)基
血清中含有未知的ELISPOT敏感成分（如異嗜性抗體等），既可能抑制斑點的生成，也可能增加噪聲斑點。因此，細胞培養(yǎng)時，建議使用無血清培養(yǎng)基。

含血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基對ELISPOT檢測的影響（達科為數(shù)據(jù)）
 

 

凍存細胞存活率對ELISPOT的影響
 

 
1.4 細胞數(shù)量和活率
由于ELISPOT技術(shù)檢測的是分泌細胞因子/抗體等的陽性細胞數(shù)或頻率，若每孔/每板/每次鋪板的細胞數(shù)不能保持一致，那得到的斑點數(shù)量SFU（斑點形成單元）就沒有可比性。另外，細胞狀態(tài)好壞是ELISPOT結(jié)果是否準確可靠的關(guān)鍵因素之一。除了影響結(jié)果的準確性，細胞狀態(tài)不佳還會影響斑點圖像的美觀性。

因此，確保細胞計數(shù)和活率分析的結(jié)果準確性以及流程標準化，才能確保實驗結(jié)果的重復(fù)性和可信度。樣本細胞的來源主要是外周血或脾臟，即使進行了分離純化，也不能避免分離后的細胞存在不同程度的紅細胞和血小板干擾。故而傳統(tǒng)的臺盼藍染色方法并不能真正精確計數(shù)淋巴細胞，采用雙熒光核染料AO/PI染色可以精準計數(shù)淋巴細胞和活率，是ELISPOT檢測流程中的推薦選擇。
 

細胞計數(shù)中任何一個環(huán)節(jié)發(fā)生改變都可能影響細胞計數(shù)的結(jié)果。
 

達科為公司為ELISPOT操作流程中的細胞計數(shù)與活率分析部分提供Cellometer品牌雙熒光細胞計數(shù)儀，確保結(jié)果的準確性與可靠性。
 

<掃描下方二維碼申請試用>

 
2. ELISPOT/FluoroSpot試劑盒
高品質(zhì)、穩(wěn)定且符合SOP生產(chǎn)流程的ELISPOT/FluoroSpot試劑盒是ELISPOT流程中關(guān)鍵的一環(huán)。
達科為公司不僅擁有自主研發(fā)的高品質(zhì)“達優(yōu)”品牌ELSIPOT試劑盒，同時與全球ELISPOT領(lǐng)域頂尖廠家合作，提供高品質(zhì)、多種屬、多規(guī)格的ELISPOT/FluoroSpot試劑盒，以滿足不同用戶需求。

 

 
3. 斑點計數(shù)和數(shù)據(jù)分析
斑點計數(shù)和數(shù)據(jù)分析是ELISPOT流程的最后一個環(huán)節(jié)，也是至關(guān)重要的一個環(huán)節(jié)。要確保最后這一至關(guān)重要的環(huán)節(jié)，首先就要保證讀板儀的自動化和標準化，減少對實驗操作人員經(jīng)驗的依賴，降低主觀因素的干擾。

Mabtech公司本身作為全球最大ELISPOT讀板儀用戶，不滿足于市面上現(xiàn)有的讀板儀主觀性過強、過于依賴操作員經(jīng)驗、操作繁瑣復(fù)雜且數(shù)據(jù)結(jié)果重復(fù)性、一致性差的現(xiàn)狀，自主研發(fā)推出了新一代的高端型號IRIS ELISPOT/FluoroSpot讀板儀與基礎(chǔ)型ASTOR ELISPOT讀板儀，顛覆了斑點計數(shù)算法，推出RAWspot技術(shù)，自動定位，自動較準，固定焦距，實現(xiàn)了數(shù)據(jù)客觀標準化，操作簡便人性化，是一款真正意義上的科學家為科學家設(shè)計/用戶為用戶設(shè)計的新一代讀板儀。
 

<掃描下方二維碼申請試用>

 

4. 實驗人員培訓
前面已經(jīng)提到，ELISPOT操作流程涉及因素較多，同時對實驗人員的實驗技能也有一定要求。為了確保ELISPOT流程的標準化，實驗人員的技能培訓是必不可少的環(huán)節(jié)。
達科為作為最早引入ELISPOT技術(shù)的生物公司，以普及ELISPOT技術(shù)和標準化為己任，在國內(nèi)舉辦了多場ELISPOT技術(shù)培訓班，從技術(shù)理論到實驗實操，讓更多實驗人員系統(tǒng)地學習、掌握ELISPOT技術(shù)。
 

5. ELISPOT項目服務(wù)平臺
如果您的實驗室還沒有具備開展ELISPOT項目的條件，達科為旗下行健雅生物實驗平臺擁有強大的專業(yè)技術(shù)支持團隊，可以為您提供讀板服務(wù)和項目。
 

 
 

6. ELISPOT技術(shù)手冊


達科為自2005年編纂國內(nèi)第一本《ELISPOT技術(shù)手冊》以來，不斷改進優(yōu)化手冊內(nèi)容，現(xiàn)已修訂至第六版，全國發(fā)行量超3萬多冊！
《ELISPOT技術(shù)手冊》內(nèi)容覆蓋ELISPOT/FluoroSpot技術(shù)原理/歷史以及發(fā)展狀況；詳細描述了ELISPOT實驗的整個操作流程以及與ELISPOT實驗相關(guān)的一系列技術(shù)；分析了ELISPOT實驗中常見問題及解決方案；談及了ELISPOT讀板儀的發(fā)展史和數(shù)據(jù)處理及結(jié)果分析；也總結(jié)了ELISPOT流程的標準化與質(zhì)量控制環(huán)節(jié)；最后講述了ELISPOT技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域和展望。
這不折不扣的是一本ELISPOT屆的“武功秘笈”，值得擁有和私藏！

點擊鏈接申請私藏：http://dakewe-equipment.mikecrm.com/HerEt8K
 

 
 

ELISPOT實驗從樣本制備到最后的數(shù)據(jù)分析，以及技術(shù)服務(wù)和技術(shù)培訓班，每個環(huán)節(jié)達科為都能提供相應(yīng)的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品與專業(yè)服務(wù)。
 

---