Tuner（DE3）pLysS 感受態(tài)細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程

Tuner（DE3）pLysS 感受態(tài)細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人角膜成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人小梁網(wǎng)細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人視網(wǎng)膜muller細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人角膜內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人脈絡(luò)膜微血管細(xì)胞完全培養(yǎng)基
人牙周膜成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠肺血管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠氣管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠氣管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠肺成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠支氣管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠支氣管成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠肺大動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠氣管和支氣管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠胰島細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠胰腺星狀細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基