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正確凍存細胞--使細胞不易被污染

瀏覽次數(shù):1315 發(fā)布日期:2022-6-15  來源:尚恩生物
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隨著實驗室細胞培養(yǎng)的發(fā)展,除了原代培養(yǎng)之外,還將建立開發(fā)或獲得眾多的細胞系。每一個細胞系均擴大了其起源細胞的應用,成為有價值的資源。若該細胞系頗為獨特,則其可能是不可替換的;替換至少也是昂貴與耗時的。因此,必須通過保存細胞系來保證這種重要投資。

由于培養(yǎng)早期傳代培養(yǎng)的選擇,有限細胞系的衰老以及連續(xù)細胞系的遺傳和表現(xiàn)不穩(wěn)定性,使細胞系在連續(xù)培養(yǎng)時有變異傾向。

此外,即使在管理最好的實驗室中也有可能發(fā)生儀器故障和污染。交叉污染以及錯誤辨識的發(fā)生率也很高。因此,存在諸多理由進行冷凍儲存細胞,總體概述有10大不得不凍存細胞的理由:

①由于遺傳不穩(wěn)定性而導致基因漂移;
②衰老,最后導致細胞系消失;
③生長特性的轉化以及惡性相關特性的獲得;
④由于選擇和去分化導致表型的不穩(wěn)定性;
⑤微生物污染;
⑥其他細胞系的交叉污染;
⑦由于操作粗心而導致的錯誤鑒別;
⑧孵育箱故障;
⑨對于保存那些不立即使用的細胞系,可節(jié)省時間和材料;
⑩需要將細胞系轉給其他使用者。

在考慮凍存細胞之前,需滿足以下特定條件:

01
確認凍存前需證實細胞系未受污染,且確為該細胞系。盡管對于新獲得的細胞系,可以在完全確認前凍存幾支,但在大量凍存前應進行徹底確認。

02
凍存時間,如果是有限細胞系,這些細胞應經(jīng)5代倍增生長,獲得足夠量的細胞再進行凍存。連續(xù)細胞系應將其克隆化,選擇特征性的克隆,待生長至足夠數(shù)量再進行凍存。連續(xù)細胞系有其優(yōu)勢:它們可無限生長,生長比較迅速,容易克隆,但是它們缺乏遺傳穩(wěn)定性。有限細胞系通常或接近二倍體。在一定傳代水平間是穩(wěn)定的,但是,它們很難克隆,生長緩慢,最終死亡或發(fā)生轉化。

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