實(shí)驗(yàn)室關(guān)閉或突發(fā)緊急情況后恢復(fù)設(shè)備狀態(tài)的四個步驟

 

疫情的陰霾逐漸消散，大家將陸續(xù)重返實(shí)驗(yàn)室，重啟暫停許久的研究工作。

但實(shí)驗(yàn)室關(guān)閉或突發(fā)緊急情況造成的設(shè)備停用、設(shè)備維護(hù)缺失、再次開啟時的調(diào)試等等問題擺在面前，重返實(shí)驗(yàn)室時大家都不免有些緊張。
如何重整旗鼓，將實(shí)驗(yàn)設(shè)備恢復(fù)到應(yīng)有的狀態(tài)？為了幫您輕松重返實(shí)驗(yàn)室，我們有著多年實(shí)戰(zhàn)經(jīng)驗(yàn)的工程師，為您準(zhǔn)備了重返實(shí)驗(yàn)室的四步指南。

這個問題看上去似乎并不重要，但實(shí)際情況是，以錯誤的方式為設(shè)備接通電源可能會對系統(tǒng)性能造成不良影響。以下為需要遵循的一些通用方法：

   • 首先啟動PC計算機(jī)：計算機(jī)是顯微鏡系統(tǒng)的“大腦”，所以記住要首先啟動和登錄PC計算機(jī)。
   • 打開系統(tǒng)所有硬件：根據(jù)系統(tǒng)情況不同，可能需要特別注意打開硬件的順序。比如：在打開觸控屏TPC之前，必須先接通奧林巴斯系統(tǒng)控制器CBH電源。有關(guān)具體說明，請參閱您的手冊。
   • 啟動軟件：如果您在軟件啟動過程中遇到錯誤，我們將為您提供幫助！相關(guān)技術(shù)協(xié)助請與您當(dāng)?shù)氐匿N售代表聯(lián)系。

 

設(shè)備接通電源后，需要花一些時間適當(dāng)準(zhǔn)備、放置和調(diào)平樣品才能進(jìn)行成像。操作提示如下：

   • 準(zhǔn)備樣品

首先，選擇適當(dāng)?shù)纳w玻片。蓋玻片大多為國標(biāo) 0.17毫米厚（170微米）。配合蓋玻片使用的奧林巴斯物鏡，需要合適的厚度才能獲得良好的圖像質(zhì)量。如果蓋玻片太厚或太薄，就可能影響清晰度。

務(wù)必檢查蓋玻片的厚度，盡量使用標(biāo)準(zhǔn)載玻片。某些應(yīng)用可以使用塑料載玻片。但對于熒光成像而言，塑料具有自發(fā)熒光特性。它會在藍(lán)色和綠色通道（有時在紅色通道）中產(chǎn)生明顯的背景光。

另外，在成像之前清潔蓋玻片和載玻片也非常重要。比較好用的清潔溶液為無水乙醇。另外也可以選擇光學(xué)清潔劑，比如OLYMPUS HYPER CLEAN 6310 Optical Lens Cleaner。

在清潔光學(xué)器件時，必須要使用擦鏡紙或脫脂棉。如果使用普通面巾紙或?qū)嶒?yàn)室紙巾，會有嚴(yán)重掉屑影響成像。

   • 加載樣品
接下來，以正確的朝向在顯微鏡上放置準(zhǔn)備好的樣品。原則上蓋玻片朝向物鏡，如正置顯微鏡蓋玻片要朝上放置，倒置顯微鏡則蓋玻片朝下放置。 倒置顯微鏡需要將切片顛倒放置，常見的錯誤是在放置切片時將蓋玻片朝上放置，這樣會導(dǎo)致圖像模糊。

使用倒置顯微鏡時，一定要檢查樣品是否密封良好。如果樣品密封性不佳，那么液體可能會接觸到您的物鏡或物鏡轉(zhuǎn)換器。這類液體可能會腐蝕或氧化光學(xué)涂層、光學(xué)膠或顯微鏡硬件和電子器件。

放置樣品時，請注意物鏡的工作距離。簡單說，工作距離就是物鏡在聚焦時需要靠近標(biāo)本的距離。一般情況我們需使用低倍物鏡找尋焦點(diǎn)，比如10X及以下物鏡。

   • 調(diào)平樣品

很多時候研究人員一般不需要擔(dān)心樣品的平整度問題。載物臺既是固定的又是平整的，樣品托架是平整的，載玻片也是平整的。
但是對于共聚焦顯微鏡、TIRF或圖像拼接等更為敏感的應(yīng)用而言，樣品的平整度至關(guān)重要。當(dāng)樣品發(fā)生傾斜時，就可能會產(chǎn)生虛焦。例如進(jìn)行圖像拼接操作時，會產(chǎn)生明顯拼痕。
解決方法是通過某些載物臺插入配件上的校平螺釘來改善樣品的平整度。校平螺釘通常位于載物臺樣品適配器的四周。 左圖：使用經(jīng)過良好對準(zhǔn)的奧林巴斯FV3000激光掃描共聚焦顯微鏡和平坦樣品采集的圖像。

右圖：使用經(jīng)過良好對準(zhǔn)的FV3000激光掃描共聚焦顯微鏡和不平坦樣品所采集的圖像。
陰影的來源有些時候很難確定。通常情況下，樣品在樣品托架內(nèi)不平整就可能會造成陰影。
（使用20X UPlanXApo物鏡采集的圖像。洋紅色為Hoechst，綠色為MAP2（MCA-5H11）經(jīng)Alexa 488染色）。

 

 

   • 確定您的浸沒介質(zhì)

奧林巴斯物鏡常見的介質(zhì)類型：空氣、水、無熒光鏡油和硅油。

如果物鏡所使用的浸沒介質(zhì)選擇錯誤，圖像質(zhì)量就會受到影響。此外，如果浸油進(jìn)入到并非為油浸設(shè)計的物鏡內(nèi)，就可能會造成設(shè)備損壞。

由于這些方面的原因，了解為您的物鏡設(shè)計的浸沒介質(zhì)非常關(guān)鍵。我們的物鏡上的顏色標(biāo)記可以讓您輕松識別相應(yīng)的浸沒介質(zhì)，確保您選擇正確。

另外，還需要考慮您的工作流程。不要在使用60X硅油物鏡成像之后，立即切換到60X水浸物鏡，硅油和水的混合不會獲得清晰的圖像。此外，在水浸之前，需要將載玻片取出并進(jìn)行清潔。

最后，務(wù)必要使用物鏡制造商為您提供的專用鏡油。
 

標(biāo)準(zhǔn)無熒光鏡油（左）和硅油（右）。
奧林巴斯有很多物鏡使用鏡油，確保使用正確的鏡油對于成像成功至關(guān)重要。
另外避免在蓋玻片將兩種浸油混合使用。

 

 

標(biāo)本準(zhǔn)備好，就可以進(jìn)行圖像采集步驟了。以下為一些圖像采集的技巧：

   • 采集圖像的有效做法
通過共聚焦或?qū)捯晥鰺晒怙@微鏡采集圖像時，通常要合理的匹配照明亮度和曝光時間，這樣可以減少光漂白和光毒性。
如照明亮度過低，采用較高的檢測靈敏度會導(dǎo)致噪音；如照明亮度過高，即會產(chǎn)生光漂白和光毒性。所以，要平衡照明亮度和檢測器靈敏度參數(shù)，不同的標(biāo)本要適當(dāng)調(diào)整。
可以嘗試先使用較低的照度和較高的檢測靈敏度。這樣可以減少光漂白和光毒性。
   • 校正環(huán)
我們的某些物鏡配有校正環(huán)。在沒有經(jīng)過培訓(xùn)的情況下，這些功能可能會令人困惑。一般性指導(dǎo)原則包括：
1. 無蓋玻片時，請使用0.0；而對于常見的0.17mm的蓋玻片，則請將矯正環(huán)轉(zhuǎn)到0.17的位置。
2. 檢查校正環(huán)上是否標(biāo)有溫度提示。如標(biāo)有溫度提示，則還要考慮室溫與所標(biāo)溫度是否匹配。請根據(jù)溫度設(shè)置校正環(huán)。在室溫的情況下，請將矯正環(huán)上白色數(shù)值對準(zhǔn)標(biāo)記線，在37°C的情況下，請將黃色的數(shù)值對準(zhǔn)標(biāo)記線。開始成像時，在保持聚焦圖像亮度的同時優(yōu)化校正環(huán)。這一步需要耐心，并且要多加練習(xí)。如果無法優(yōu)化，則第一步時應(yīng)根據(jù)是否有蓋玻片將校正環(huán)轉(zhuǎn)到標(biāo)記0.0或0.17。

60X UplanXApo物鏡（右）使用標(biāo)準(zhǔn)浸油，且沒有校正環(huán)。
60X UplanApo油浸物鏡（左）使用設(shè)為0.17（＃1.5蓋玻片）的校正環(huán)。
60X UPlanSApo（中間）使用硅油浸沒，并在37°C時將校正環(huán)設(shè)為0.17（＃1.5）。
優(yōu)化校正環(huán)位置對于獲得清晰的圖像至關(guān)重要。

   • 聚光鏡對準(zhǔn)

如果您的主要應(yīng)用是熒光觀察，那么常規(guī)顯微鏡操作時，可能不會使用聚光鏡。在這種情況下，可使用聚光鏡手柄將聚光鏡移離樣品。
如果想要進(jìn)行明場、相襯或DIC成像，那么通常第一步要校準(zhǔn)聚光鏡的位置。在明場模式下，對樣品聚焦，然后關(guān)閉視場光圈以便可以看到視場光欄的像。這一過程在10X或20X倍率下最容易完成。
如果視場光欄的像并不清晰或沒有居中，可通過進(jìn)行科勒照明讓聚光鏡高度和中心處對齊。

聚光鏡對準(zhǔn)程序：（a）關(guān)閉視場光圈，（b）將視場光欄的像中心居中，（c）確認(rèn)精確中心，讓視場光欄的像內(nèi)切到視場邊緣，（d）然后讓視場光欄的像外切。

 

   • 文件大小

顯微鏡文件可能會很大。但文件的大小可以通過某些方式縮減。比如無效數(shù)據(jù)，如果用“以防萬一”對所有位置進(jìn)行成像的辦法，實(shí)際上會讓問題變得更復(fù)雜。
利用您所需要的視場、分辨率和位深，對所需要的部位進(jìn)行成像。會減少數(shù)據(jù)存儲和數(shù)據(jù)處理帶來的不必要的負(fù)擔(dān)。

   • 保存文件

要盡可能地馬上保存文件。計算機(jī)和硬盤在任何時候都有可能出現(xiàn)問題，因此要將圖像保存到多個位置。
使用U盤或外部硬盤驅(qū)動器時務(wù)必當(dāng)心。這類設(shè)備容易造成病毒感染，讓病毒或惡意軟件在計算機(jī)之間傳播。
成像系統(tǒng)PC計算機(jī)為了避免影響性能，很多PC沒有安裝防病毒軟件。這樣就造成計算機(jī)更容易感染病毒。成像系統(tǒng)PC出現(xiàn)病毒感染可能并不會立即體現(xiàn)，但系統(tǒng)運(yùn)行速度可能會變得緩慢，或者偶爾發(fā)生崩潰。
為了避免這類風(fēng)險，請在外部存儲驅(qū)動器連接到成像系統(tǒng)PC計算機(jī)之前，先對其進(jìn)行病毒掃描。
   • 文件格式
奧林巴斯使用諸如OIR、OIF、VSI和OIB等專有文件格式。這些格式可以：
• 提供未經(jīng)壓縮的全分辨率圖像
• 保留適用于奧林巴斯成像系統(tǒng)的文件架構(gòu)
• 記錄成像參數(shù)中的元數(shù)據(jù)
在安裝適當(dāng)插件的情況下，ImageJ可以打開這類奧林巴斯文件。我們建議盡可能以奧林巴斯文件格式保存圖像，但有時也需要將文件導(dǎo)出為TIFF、JPEG 2000或其他格式。

注意：導(dǎo)出文件選項或?qū)С鰣D像文件類型，均會造成圖像壓縮或分辨率降低。請避免使用JPEG圖像，是因?yàn)檫@種格式往往會導(dǎo)致圖像被壓縮，并且細(xì)節(jié)數(shù)據(jù)會丟失。
 

 

正確關(guān)閉系統(tǒng)與正確啟動系統(tǒng)同樣重要。以下為一些有效做法：

   • 使用后先清潔顯微鏡
成像完成后，清理、清潔系統(tǒng)不僅是基本要求，還可以防止硬件損壞。
比如，油浸物鏡使用的標(biāo)準(zhǔn)浸油，如果留在物鏡上就會變干、變硬。浸沒油在遺留幾天后很難清洗，甚至可能會流到其他顯微鏡表面。
顯微鏡載物臺或成像區(qū)域往往會存在載玻片封片劑等，這些表面都需要進(jìn)行清潔。尤其是存在可見液體或其他殘留物的地方。
成像后取出的樣品，最好按要求保存在37°C、室溫、4°C、-20°C或-80°C條件下。大多數(shù)載玻片或培養(yǎng)皿為了避免破裂需要在盒子里保存，且要避光。有些樣品必須及時返回細(xì)胞培養(yǎng)箱中。
注意：在從一個使用者到另一使用者的切換過程中，諸如目鏡、觸摸面板控件和聚焦手柄之類通常需要接觸的表面，均為可能受到污染和造成感染。
為了減少病毒傳播，清潔這些表面非常重要！我們建議使用75%消毒酒精，清潔觸摸控件面板和目鏡。為了防止乙醇損壞橡膠，需取下目鏡上的橡膠眼罩單獨(dú)清理。

   • 關(guān)閉顯微鏡系統(tǒng)電源

正確關(guān)閉系統(tǒng)有助于確保：
1. 硬件的正確維護(hù)
2. 讓系統(tǒng)隨時可供下一用戶使用
在關(guān)閉系統(tǒng)之前，留意一下下一位使用者將會何時使用。如果馬上就要使用系統(tǒng)，可以注銷用戶，同時保持所有硬件繼續(xù)運(yùn)行。但如果一小時或更長時間不使用，建議將系統(tǒng)關(guān)閉。這樣做可以減少激光器、燈泡、風(fēng)扇等損耗，延長組件的使用壽命。
關(guān)閉硬件之前，務(wù)必先要退出軟件。如果先關(guān)閉硬件，后關(guān)閉軟件，可能會導(dǎo)致發(fā)生錯誤，并給下一位使用者帶來潛在問題。

最后，如果您還有其他無法解決的問題，請撥打我們的服務(wù)熱線：400-801-5530   我們會盡力為您排憂解難。