避暗儀分為明、暗兩室,其間有一直徑為3cm的圓洞,兩室底部均鋪以銅柵。暗室底部銅柵可通電,電壓通過按鈕調(diào)節(jié),一般為40V,50Hz。實驗分為訓練和測試兩部分,訓練時暗室底部銅柵通電。
訓練
①MOS法:訓練在一天內(nèi)完成,先將小鼠放入避暗儀中適應環(huán)境3 min,訓練時將小鼠背對洞口放入明室內(nèi),其進入暗室受到電擊即取出;
②MOL法:訓練在一天內(nèi)完成,小鼠適應環(huán)境3min,訓練3min;
③MUL法:連續(xù)3天在同一時間將小鼠放入避暗儀中適應3min,第三天適應完成后開始訓練,3min后取出。適應環(huán)境和訓練時任小鼠在明室和暗室之間自由穿梭,步入潛伏期大于3min者棄去不用。
測試訓練完成24h后將小鼠再次放入明室,記錄其第一次進入暗室所需的時間,即步入潛伏期(step through latency, STL)和5min內(nèi)進入暗室的次數(shù),即錯誤次數(shù)(error times, ETs)。若5min內(nèi)小鼠未進入暗室則STL記為300s,ETs記為0。
避暗實驗依鼠類的嗜暗習性而設計,小鼠受電擊而減少向暗室移動的行為,屬于被動回避性條件反射。這種暗環(huán)境被動回避可表現(xiàn)出小鼠受電擊后不敢進入暗室而下一次避暗過程再次進入的特點,即應激刺激的學習性和遺忘性,而應激對小鼠記憶亦有損害作用。
在實驗中觀察到剛放入明室的小鼠會出現(xiàn)洗臉、舔毛等刻板動作,可能是陌生環(huán)境刺激所致,這種刺激有增強小鼠應激反應從而影響訓練效果的可能。研究表明,小鼠對新環(huán)境的記憶比回避反應更易消退,訓練時的應激狀態(tài)可能使適應失去作用,測試過程小鼠受陌生環(huán)境的刺激,影響記憶的再現(xiàn)。
綜上所述,小鼠對環(huán)境的適應程度可能在較大程度上影響了避暗實驗的結(jié)果,多次適應限時訓練是相對合適的訓練方法。
附錄SuperPAS避暗實驗軟件廣泛用于學習記憶功能、認知神經(jīng)科學、神經(jīng)生理學、神經(jīng)藥理學、認知功能退行性變性等實驗研究方面的研究,簡單易操作,容易判別結(jié)果,可信度高,既可單獨作為檢測實驗提供課題參數(shù),也可以作為其他學習記憶和認知功能實驗的輔助或預篩選實驗。
測試指標