動物疼痛模型——鼠尾光照測痛實驗

瀏覽次數(shù)：1977　發(fā)布日期：2022-4-12　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負

尾閃試驗( tail-flick test)也叫鼠尾光照測痛實驗，是一種用熱作刺激的急性傷害性知覺疼痛的實驗，即用熱刺激動物（鼠類）的尾巴，當其尾部受到傷害性刺激時會產(chǎn)生明顯的躲避反應(yīng)，這是一種脊髓的屈曲反射。該疼痛模型最早由D'Amour和Smith在1941年描述，它可測試輕度麻醉的動物而且不受動物運動協(xié)調(diào)性的影響，因而比熱板試驗具有一定的優(yōu)越性，但是尾閃試驗的尾巴溫度可能會影響實驗結(jié)果，容易造成假陽性或假陰性，試驗最終的行為反應(yīng)也較為復(fù)雜（如舔其后爪）。Janssen等(1963)根據(jù)尾閃試驗用溫水(49度)替代熱光源來刺激動物的尾巴測試其反應(yīng)時間，更新的實驗裝置則可用較局限的熱點刺激，專門刺激菜一個單一的腳爪，然后測定其反應(yīng)潛伏期，這比熱板試驗刺激的4個全部的腳爪或尾閃試驗刺激的尾部更為精細。

（一）實驗材料

1．實驗動物健康成年雄性小鼠(30 - 35g)或大鼠(200 - 250g)，分組飼養(yǎng)。

2．實驗藥物生理鹽水（對照）與鎮(zhèn)痛藥物（如嗎啡，l0mg/kg，皮下注射）。

3．帶27((大鼠)或30G（小鼠）針頭的1.0ml注射器。

4．帶自動計時器或秒表的尾閃試驗裝置。

5．限制大鼠或小鼠活動的包括毛巾或塑料小筒。

（二）實驗步驟

1、從動物房取出實驗動物，稱重后，讓動物在實驗室適應(yīng)30min，將對照組與實驗組分開；

2、藥物準備對照組（生理鹽水等）及給藥組（如嗎啡等，計算藥物濃度，如大鼠按2mg，kg紿藥，小鼠按10mg/kg給藥）；

3、測定動物的基礎(chǔ)反應(yīng)潛伏期( baseline latencies) 用尾閃試驗測試儀（即在一小孔的平板下有一個發(fā)熱光源，將大鼠（尾尖部前50mm左右）或小鼠(尾尖部前約15mm)的尾部放在小孔的上方，啟動發(fā)熱光源開始計時，直到尾巴躲避為止，調(diào)整光源的強度，設(shè)大多數(shù)鼠的尾部躲閃時間在3- 4s，如果沒有躲避反射則把試驗終止時間設(shè)定為10s，以免燒傷；

4、藥物注射將不同的藥物包括對照溶液，隨機順序注射到實驗動物體內(nèi)。注意計算好給藥時間與試驗測試的時間間隔，試驗持續(xù)時間，同時給出足夠的機動時間（如實驗記錄，藥物更換等），必要時讓另外的人注射對照劑或?qū)嶒炈幤罚しㄔ囼灒?/span>

5、在給藥后15，30及60min時，即測試尾閃反應(yīng)，將動物放到尾閃測試板并把其尾部放到光源小孔上，即開始計時，觀察動物尾部躲避反應(yīng)的時間，或直到終止(cut-off)時間。注意一次試驗只測1個時間點，而不是3個時間點；

6、將動物放到尾閃測試儀上到反應(yīng)出現(xiàn)時的潛伏期或終止實驗時間記錄下來，在所有實驗動物完成測試后（一般每組至少8個數(shù)據(jù)），分組將其平均并作統(tǒng)計學(xué)評估。

尾閃試驗時，也常用到一種稱為最大可能效應(yīng)百分比（percent max．mum possible effect，MPE，%），即：MPE(%)=[（給藥后一基礎(chǔ)反應(yīng)），（終止時間一基礎(chǔ)反應(yīng)）] x 100這里基礎(chǔ)反應(yīng)與給藥后均指反應(yīng)潛伏期，所有動物在測試前，應(yīng)該先測定一下它的反應(yīng)潛伏期（基礎(chǔ)反應(yīng)反應(yīng)潛伏期）；給藥后反應(yīng)潛伏期是指動物接受藥物（包括對照用生理鹽水或其他載體）注射（或灌注）后實驗中的反應(yīng)潛伏期；終止時間是指給藥后動物不能對熱作出反應(yīng)而終止試驗的時間(10s)。

（三）注意事項

1、如果給藥前或?qū)φ战M動物測不到反應(yīng)或反應(yīng)潛伏期很靠近試驗終止時間，說明刺激強度太弱（光源溫度設(shè)定較低），必須加大刺激強度。

2、必須保持所有的實驗程痔一致，盡量輕巧抓取動物，讓動物有足夠的時間適應(yīng)實驗者的氣味及實驗室環(huán)境，否則可造成實驗結(jié)果的明顯波動或不能重復(fù)。

3、刺激光源的強弱，即刺激的強度太高或太弱均可使試驗結(jié)果變化較大，而且高強度的刺激可能掩蓋實驗藥物的效果，因此，用藥前的基礎(chǔ)測試非常重要。

4、為了減少實驗的誤差，一般適量限制動物的活動，如用毛巾裹住動物或把它們放入小筒中，這兩種方法掌握不當都可造成動物的壓抑( stress)行為而影響實驗結(jié)果。

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