細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程常見(jiàn)問(wèn)題和解決方法

1、購(gòu)買細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少的情形?

研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過(guò)程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。

2、有必要做熱滅活嗎?

實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),或完全沒(méi)有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜�清的質(zhì)量,而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)”,常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

3、血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理?

血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會(huì)存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。若欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)樗�可能�?huì)阻塞您的過(guò)濾膜。

4、細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)能否更換胎牛血清?

首先要確定更換胎牛血清的理由，如果細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)異常的話，不建議隨意更換不同品牌和來(lái)源的胎牛血清。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，所以血清的來(lái)源(血源地)和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同地域和等級(jí)的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞死亡。

如果是使用的胎牛血清出現(xiàn)了問(wèn)題，比如保存不當(dāng)或操作不當(dāng)導(dǎo)致血清成分析出、混濁、污染等情況，可以優(yōu)先更換同品牌、等級(jí)、批次的血清;如果是產(chǎn)品質(zhì)量問(wèn)題更換血清品牌的話，需要用一批細(xì)胞進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)才行，以保證細(xì)胞能夠正常培養(yǎng)。

另外在購(gòu)買胎牛血清的時(shí)候要選擇正規(guī)來(lái)源和經(jīng)過(guò)海關(guān)檢疫胎牛血清，非正規(guī)來(lái)源的胎牛血清有很多安全隱患，對(duì)實(shí)驗(yàn)室、操作人員、細(xì)胞培養(yǎng)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都有很大的影響。

5、培養(yǎng)細(xì)胞什么時(shí)候需要換液?

視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。

6、培養(yǎng)基到底要不要加抗生素?

除于特殊篩選系統(tǒng)中外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。如果是沒(méi)有進(jìn)行過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)的新手，對(duì)無(wú)菌技術(shù)沒(méi)有信心的，或者提取的原代細(xì)胞，怕污染的，可以適量添加抗生素。抗生素本身也是有毒性的，有些抗生素的藥效濃度水平與毒效濃度水平非常接近，對(duì)細(xì)胞多少有傷害

7、培養(yǎng)基里的粉紅色是什么?

酚紅一般作為培養(yǎng)基中pH值的指標(biāo)：當(dāng)培養(yǎng)基呈中性時(shí)為紅色，呈酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。另外，酚紅可以模擬類固醇激素(特別是雌激素)的作用。如果要避免類固醇反應(yīng)，可以在無(wú)酚紅的培養(yǎng)基里進(jìn)行培養(yǎng)

8、如何避免細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的污染?

主要還是考慮無(wú)菌環(huán)境，盡量做好操作臺(tái)的滅菌，別把培養(yǎng)基滴落在生物安全柜的入風(fēng)口，別在培養(yǎng)箱里把培養(yǎng)基打翻。這兩個(gè)地方霉菌一旦滋生，那你就只能等著用甲醛熏蒸了。

紫外無(wú)法殺滅霉菌，酒精也不行，只能用甲醛熏蒸，但是一定要注意安全。復(fù)蘇的時(shí)候，水浴鍋也需要進(jìn)行滅菌處理。一旦出現(xiàn)污染，不要急，能救的就用抗生素救一下，但是一般情況下，選擇扔掉。避免交叉感染，要不只能整個(gè)實(shí)驗(yàn)室消毒了。

上海中喬新舟生物科技有限公司

1、原代細(xì)胞：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞、iPS誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（可提供細(xì)胞流式及免疫熒光鑒定報(bào)告，需簽訂MTA協(xié)議）。

2、培養(yǎng)基：原代細(xì)胞專用低血清、無(wú)血清、無(wú)異源蛋白無(wú)動(dòng)物成分培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑：胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。

4、細(xì)胞系（株）：種類豐富，已通過(guò)STR鑒定；提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。

5、自研產(chǎn)品：支原體檢測(cè)/清除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。

6、技術(shù)服務(wù)：細(xì)胞熒光標(biāo)記服務(wù)（GFP/RFP/LUC）、干擾/過(guò)表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建、細(xì)胞基因敲除、細(xì)胞系鑒定服務(wù)（STR）、原代細(xì)胞永生化、腫瘤細(xì)胞耐藥株構(gòu)建、原代細(xì)胞分離等。