Nucleofection核轉處理步驟及提高電轉染效率的小技巧

01

Nucleofection™核轉的處理 – 

簡單的操作方案

步驟一：

獲取目標細胞

步驟二：

混合和結合

轉移至Lonza認證的電轉杯或電轉板條中

步驟三：

選擇Nucleofector™程序，放入電轉耗材，按下開始按鈕

步驟四：

用培養(yǎng)基將電轉耗材的細胞轉移出來

步驟五:

轉移至培養(yǎng)皿中。Nucleofection™電轉后3-8小時即可檢驗
 

02

提高Nucleofection™核轉效率

小技巧：

1.準備好加了新鮮培養(yǎng)基的多孔板，并在實驗前于37°C下預平衡。

2.使用傳代次數(shù)少并具有推薦融合度或密度（對數(shù)生長）的細胞。

3.限制胰蛋白酶暴露時間，仔細監(jiān)測細胞分離情況。

4.根據優(yōu)化方案進行細胞計數(shù)并使用適量細胞數(shù)；所用細胞過少可能導致細胞死亡率增加。

5.采用高質量DNA，使用內毒素去除試劑盒進行純化；請通過測定A260:A280比值檢查各質粒制備液的純度。

6.室溫下以離心速度80-100×g和方案規(guī)定的時間進行離心。

7.離心后加入Nucleofector™溶液，混勻溶液/細胞沉淀制備成單細胞懸液，避免對細胞沉淀進行額外操作或用移液器槍頭抽吸。

8.Nucleofection™核轉后，用核轉試劑盒內配的一次性移液管在電轉耗材中的細胞頂部加入約500μL預熱培養(yǎng)基。

•輕輕將一次性移液管吸頭置于電轉耗材底部，收集細胞

•將細胞懸液輕輕接種至制備的多孔板中

•請勿重復抽吸混合細胞