胸膜肺炎放線桿菌PCR檢測(cè)試劑盒操作方法

胸膜肺炎放線桿菌PCR檢測(cè)試劑盒操作方法
 
樣本的處理（在樣本制備區(qū)進(jìn)行）：
取 n 個(gè)滅菌的 .5 mL Eppendorf 管，其中 n 為被檢樣品與陰性對(duì)照的和（陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照在試劑盒中已標(biāo)出），做標(biāo)記。(注：試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照直接作為 PCR 檢測(cè)的模板，無(wú)需提取核酸)
每管加入 600 ᦕL 裂解液，分別加入被檢樣本和陰性對(duì)照各 200 ᦕL，一份樣本換用一個(gè)吸頭，再加入 200 ᦕL 氯仿，混勻器上振蕩混勻 5 s（不能過于強(qiáng)烈，以免產(chǎn)生乳化層，也可以用手顛倒混勻），于 4℃ 2 000 r/min 離心 5 min。
取與 4... 相同數(shù)量滅菌的 .5 mL Eppendorf 管，加入 500 ᦕL 異丙醇（-20℃預(yù)冷）， 做標(biāo)記。吸取 4...2 各管中的上清液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)的管中，上清液應(yīng)至少吸取 500ᦕL，不能吸出中間層，顛倒混勻。
于 4 ℃、2 000 r/min 離心 5 min（Eppendorf 管開口保持朝離心機(jī)轉(zhuǎn)軸方向放置），小心倒去上清，倒置于吸水紙上，沾干液體(不同樣品須在吸水紙不同地方沾干)；加入 600 ᦕL 75％ 乙醇，顛倒洗滌。
于 4 ℃、2 000 r/min 離心 0 min（Eppendorf 管開口保持朝離心機(jī)轉(zhuǎn)軸方向放置），小心倒去上清，倒置于吸水紙上，盡量沾干液體（不同樣品須在吸水紙不同地方沾干）。
4 000 r/min 離心 0s（Eppendorf 管開口保持朝離心機(jī)轉(zhuǎn)軸方向放置），將管壁上的殘余液體甩到管底部，小心倒去上清，用微量加樣器將其吸干，一份樣本換用一個(gè)吸頭，吸頭不要碰到有沉淀一面，室溫干燥 3 min，不能過于干燥，以免 RNA 不溶。
加入 ᦕL DEPC 水，輕輕混勻，溶解管壁上的 RNA，2 000 r/min 離心 5 s，冰上保存?zhèn)溆�。提取�?RNA 須在 2 h 內(nèi)進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增；若需長(zhǎng)期保存須放置-70 ℃冰箱內(nèi)。