Leica:您的樣本診斷流程小貼士來(lái)啦！

第1-11步

徠卡101

樣本的接收和轉(zhuǎn)移

從患者到病理學(xué)家，準(zhǔn)備樣本進(jìn)行診斷需要細(xì)心、經(jīng)驗(yàn)以及合理的流程。

 

徠卡特地為大家整理了取材、組織處理、包埋、切片以及染色等（常規(guī)、特殊、IHC以及FISH）101步操作流程，幫助大家更有效、更簡(jiǎn)單地獲得實(shí)驗(yàn)方案，避免錯(cuò)誤的發(fā)生。

 

步驟一

避免機(jī)械性損傷

🙆 正確：小心移動(dòng)組織，避免機(jī)械損傷。外科以及解剖過(guò)程中，在任何需要新鮮組織的情況下，都必需非常小心地采集組織樣本；

🙅 錯(cuò)誤：組織在固定前由于擠壓和撕裂引起的機(jī)械損傷。

淋巴組織：典型的人為擠壓引起的損傷。在圖中表現(xiàn)為暗而變形的細(xì)胞核，以致其中一些細(xì)胞拉長(zhǎng)而呈強(qiáng)的嗜堿性。

 

步驟二

避免樣本干燥

🙆 正確：避免樣本在固定前干燥。如果不能馬上進(jìn)行固定的話，使用含生理鹽水的濕紗布覆蓋避免干燥；

🙅 錯(cuò)誤：組織在固定前在吸水的材料表面放置一段時(shí)間。

這塊新鮮的組織剛從患者的體內(nèi)取出。由于它被放在托盤(pán)中而且環(huán)境溫度較高，如果不馬上進(jìn)行固定的話就會(huì)迅速變干引起組織損傷。

 

步驟三

避免熱損傷

🙆 正確：盡可能避免樣本局部過(guò)熱引起的損傷（一些灼燒損傷可能是沒(méi)法避免的）；

🙅 錯(cuò)誤：一些不必要的局部過(guò)熱引起組織損傷，新鮮組織特別容易因此受損。

乳腺組織邊緣部分區(qū)域的細(xì)胞呈強(qiáng)嗜酸性并已丟失細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)詳情。其原因在于采集樣本過(guò)程中， 灼燒引起局部過(guò)熱而導(dǎo)致?lián)p傷，相鄰的腺體組織沒(méi)有受到影響。

 

步驟四

避免化學(xué)損傷

🙆 正確：外界化學(xué)物質(zhì)（如：消毒劑）對(duì)新鮮組織的污染；

🙅 錯(cuò)誤：還沒(méi)有經(jīng)過(guò)固定的組織很容易被外界化學(xué)物質(zhì)浸潤(rùn)和破壞。

Monsel溶液（堿式硫酸鐵溶液）是一個(gè)典型的止血?jiǎng)�，用于控制活檢組織粘膜的血液流動(dòng)，它能夠引起粘膜表面的血液凝固與細(xì)胞壞死。如果應(yīng)用在活檢，則容易引起局部嗜堿性以及早期壞死的現(xiàn)象，從而導(dǎo)致病理改變。Monsel溶液損傷，常見(jiàn)于重新進(jìn)行活檢取材或者手術(shù)切除后。圖A：H&E染色后的宮頸活檢圖以及圖B：用Perl染色后的組織表面表現(xiàn)出大量的鐵沉積，兩圖都能體現(xiàn)該現(xiàn)象。

 

步驟五

正確進(jìn)行樣本標(biāo)記

🙆 正確：組織樣本必需容易辨識(shí)，所有的樣本細(xì)節(jié)必需及時(shí)記錄清楚；

🙅 錯(cuò)誤：組織樣本細(xì)節(jié)記錄延遲，信息提供不完整。

這塊新鮮的組織剛從患者的體內(nèi)取出。由于它被放在托盤(pán)中而且環(huán)境溫度較高，如果不馬上進(jìn)行固定的話就會(huì)迅速變干引起組織損傷。

 

步驟六

確保及時(shí)固定

🙆 正確：必需進(jìn)行及時(shí)固定，如果樣本不能馬上進(jìn)行固定的話，短時(shí)間內(nèi)可以保存在4℃的冰箱中；

🙅 錯(cuò)誤：固定延遲（組織結(jié)構(gòu)在離體后就隨即開(kāi)始發(fā)生變性）。

A. 此尸檢肝樣本（H&E）沒(méi)有及時(shí)固定，導(dǎo)致核界限以及細(xì)胞質(zhì)細(xì)節(jié)不清楚，中心血管內(nèi)出現(xiàn)大量細(xì)菌；
B. 此切片肌肉纖維組織的核染色質(zhì)保存不完整，就是固定不及時(shí)引起的。

 

步驟七

使用合適的試劑和容器進(jìn)行固定

🙆 正確：合適量的固定試劑（固定液和組織比例至少為20:1）放在合適大小的容器中，這可以避免新鮮組織損傷，確保高質(zhì)量固定；

🙅 錯(cuò)誤：組織樣本被擠在一個(gè)小的容器當(dāng)中，導(dǎo)致樣本因沒(méi)有被全部覆蓋到而固定不充分。

大量組織擠在一個(gè)很小的容器中，組織擠在小的容器中可導(dǎo)致組織損傷、固定不充分。

 

步驟八

檢查固定液的pH值

🙆 正確：高質(zhì)量固定試劑以及最優(yōu)的pH值；

🙅 錯(cuò)誤：固定液質(zhì)量差，pH值不明確。酸性的福爾馬林會(huì)很快與細(xì)胞內(nèi)免疫球蛋白發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生蛋白交聯(lián)。而接近中性的福爾馬林溶液雖然也會(huì)和免疫球蛋白發(fā)生反應(yīng)，但是反應(yīng)速度會(huì)相對(duì)慢一點(diǎn)。進(jìn)行染色前，需要進(jìn)行修復(fù)，以恢復(fù)免疫球蛋白結(jié)構(gòu)。

A. 使用了不合適的pH值，正常的福爾馬林緩沖液pH值必需在6.8-7.0之間。
B. 血管染色圖中有棕褐色顆粒狀沉淀，就是所謂的蛋白交聯(lián)（酸性福爾馬林引起）。酸性福爾馬林很容易形成這種蛋白交聯(lián)，特別是紅細(xì)胞。

 

步驟九

促進(jìn)大標(biāo)本的固定

🙆 正確：為了固定液能迅速的滲透入樣本中需要控制樣本的大小。大標(biāo)本可以在采集后送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行初步分割后固定（可以考慮切成多條以促進(jìn)固定）；

🙅 錯(cuò)誤：大組織樣本在取材前雖然延長(zhǎng)了固定時(shí)間，但樣本中間還是可能沒(méi)有固定好或者有明顯的變形。

豬的心臟被切成多條，從而促進(jìn)組織樣本的固定，這些碎條大概有4-5 mm厚。

 

步驟十

避免固定過(guò)度

🙆 正確：固定時(shí)間適宜-及時(shí)送檢；

🙅 錯(cuò)誤：組織樣本固定時(shí)間有時(shí)候過(guò)長(zhǎng)——組織樣本沒(méi)有按照不同的優(yōu)先時(shí)間進(jìn)行轉(zhuǎn)移。

按照固定時(shí)間的先后送檢組織，尤其是含有冰凍標(biāo)本的時(shí)候。

 

步驟十一

輕取樣本

🙆 正確：輕取樣本——保證質(zhì)脆樣本形態(tài)完好；

🙅 錯(cuò)誤：粗魯?shù)啬萌�樣�?mdash;—質(zhì)脆樣本很容易受損。

樣本轉(zhuǎn)移過(guò)于粗魯，容器底部沉積了很多組織碎片。即便是組織致密的標(biāo)本現(xiàn)在也成了組織碎片。

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