接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中,30℃~35℃培養(yǎng)18小時~24小時;接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基上,23~28℃培養(yǎng)24~48小時,上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml 含菌數(shù)小于100cfu(菌落形成單位)的菌懸液。
接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上,23~28℃培養(yǎng)5~7天,加入3~5ml含0.05%(v/v)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液,將孢子洗脫。然后,用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi),用含0.05%(v/v)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)小于100cfu的孢子懸液。
菌懸液在室溫下放置應(yīng)在2小時內(nèi)使用,若保存在2~8℃可在24小時內(nèi)使用。
黑曲霉孢子懸液可保存在2~8℃,在驗證過的貯存期內(nèi)使用。