pCMV-N-EGFP (綠色熒光蛋白)
pCMV-N-EGFP (綠色熒光蛋白)
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產(chǎn)品編號 |
產(chǎn)品名稱 |
包裝 |
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YJ2707 |
pCMV-N-EGFP (綠色熒光蛋白) |
1μg |
產(chǎn)品簡介：
- pCMV-N-EGFP是上海一基自行研發(fā)的哺乳動物細胞表達質(zhì)粒，用于表達N端含EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein, 增強綠色熒光蛋白)標(biāo)簽的融合蛋白。該質(zhì)粒含有CMV啟動子，可以高效啟動目的蛋白在細胞中的表達。在多克隆位點的前面有一個EGFP的完整編碼序列，因此在多克隆位點根據(jù)閱讀框插入目的基因就可以表達N端含有EGFP標(biāo)簽的融合蛋白。利用EGFP的熒光特性可以比較容易地觀察融合蛋白的表達水平和細胞內(nèi)定位，也可以利用EGFP抗體來檢測或免疫沉淀融合蛋白。該質(zhì)粒為卡那霉素抗性。轉(zhuǎn)染細胞后，可以使用G418篩選穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株。
- pCMV-N-EGFP質(zhì)粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide CMV promoter
T3 promoter and T3 primer binding site
EGFP
Multiple cloning site
T7 promoter and T7 primer binding site
SV40 polyA signal
f1 origin of ss-DNA replication bla promoter
SV40 promoter
Neomycin/kanamycin resistance ORF
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal pUC origin
Ø pCMV-N-EGFP質(zhì)粒(5003bp)的圖譜如下：
Position
1-602
620-639
677-1393
1394-1483 1503-1524
1536-1919 2057-2363
2388-2512
2532-2870
205-3696
3697-4155
4284-4951
Ø pCMV-N-EGFP的多克隆位點的詳細圖譜如下：
SacI EGFP
651 GAGCTCTAGC GCTACCGGTC GCCACCATGG TGAGCAAGGG CGAGGAGCTG
CTCGAGATCG CGATGGCCAG CGGTGGTACC ACTCGTTCCC GCTCCTCGAC
701 TTCACCGGGG TGGTGCCCAT CCTGGTCGAG CTGGACGGCG ACGTAAACGG
AAGTGGCCCC ACCACGGGTA GGACCAGCTC GACCTGCCGC TGCATTTGCC
751 CCACAAGTTC AGCGTGTCCG GCGAGGGCGA GGGCGATGCC ACCTACGGCA
GGTGTTCAAG TCGCACAGGC CGCTCCCGCT CCCGCTACGG TGGATGCCGT
801 AGCTGACCCT GAAGTTCATC TGCACCACCG GCAAGCTGCC CGTGCCCTGG
TCGACTGGGA CTTCAAGTAG ACGTGGTGGC CGTTCGACGG GCACGGGACC
851 CCCACCCTCG TGACCACCCT GACCTACGGC GTGCAGTGCT TCAGCCGCTA
GGGTGGGAGC ACTGGTGGGA CTGGATGCCG CACGTCACGA AGTCGGCGAT
901 CCCCGACCAC ATGAAGCAGC ACGACTTCTT CAAGTCCGCC ATGCCCGAAG
GGGGCTGGTG TACTTCGTCG TGCTGAAGAA GTTCAGGCGG TACGGGCTTC
951 GCTACGTCCA GGAGCGCACC ATCTTCTTCA AGGACGACGG CAACTACAAG
CGATGCAGGT CCTCGCGTGG TAGAAGAAGT TCCTGCTGCC GTTGATGTTC
1001 ACCCGCGCCG AGGTGAAGTT CGAGGGCGAC ACCCTGGTGA ACCGCATCGA
TGGGCGCGGC TCCACTTCAA GCTCCCGCTG TGGGACCACT TGGCGTAGCT
1051 GCTGAAGGGC ATCGACTTCA AGGAGGACGG CAACATCCTG GGGCACAAGC
CGACTTCCCG TAGCTGAAGT TCCTCCTGCC GTTGTAGGAC CCCGTGTTCG
1101 TGGAGTACAA CTACAACAGC CACAACGTCT ATATCATGGC CGACAAGCAG
ACCTCATGTT GATGTTGTCG GTGTTGCAGA TATAGTACCG GCTGTTCGTC
1151 AAGAACGGCA TCAAGGTGAA CTTCAAGATC CGCCACAACA TCGAGGACGG
TTCTTGCCGT AGTTCCACTT GAAGTTCTAG GCGGTGTTGT AGCTCCTGCC
1201 CAGCGTGCAG CTCGCCGACC ACTACCAGCA GAACACCCCC ATCGGCGACG
GTCGCACGTC GAGCGGCTGG TGATGGTCGT CTTGTGGGGG TAGCCGCTGC
1251 GCCCCGTGCT GCTGCCCGAC AACCACTACC TGAGCACCCA GTCCGCCCTG
CGGGGCACGA CGACGGGCTG TTGGTGATGG ACTCGTGGGT CAGGCGGGAC
1301 AGCAAAGACC CCAACGAGAA GCGCGATCAC ATGGTCCTGC TGGAGTTCGT
TCGTTTCTGG GGTTGCTCTT CGCGCTAGTG TACCAGGACG ACCTCAAGCA
BamHI HindIII
1351 GACCGCCGCC GGGATCACTC TCGGCATGGA CGAGCTGTAC AAGGGATCCA
CTGGCGGCGG CCCTAGTGAG AGCCGTACCT GCTCGACATG TTCCCTAGGT
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1401 |
PstI |
EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI |
XbaI SpeI |
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AGCTTCTGCA GGAATTCGAT ATCGTCGACA GATCTCTCGA GTCTAGAACT | |||
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|
TCGAAGACGT CCTTAAGCTA TAGCAGCTGT CTAGAGAGCT CAGATCTTGA | ||
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1451 |
ApaI |
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AGTGGGCCCG GTACCTTAAT TAATTAAGGT ACC |
| ||
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TCACCCGGGC CATGGAATTA ATTAATTCCA TGG |
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Ø pCMV-N-EGFP中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-EGFP)包括： |
BbsI | |||||||||||
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AclI |
AflII |
AhdI |
AscI |
AsiSI |
BaeI | |||||||
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BbvCI |
BlpI |
BmgBI |
BsiWI |
BsmBI |
BspEI |
BspQI | ||||||
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BssHII |
BstEII |
BstXI |
BstZ17I |
EarI |
EcoNI |
FseI | ||||||
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NotI |
NruI |
PflMI |
PmeI |
PmlI |
PpuMI |
PshAI | ||||||
|
PspXI |
SacII |
SapI |
SbfI |
ScaI |
SgrAI |
SmaI | ||||||
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SwaI |
TspMI |
XcmI |
XmaI |
XmnI |
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| ||||||
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Ø pCMV-N-EGFP中的單酶切位點（Restriction enzymes that cut pCMV-N-EGFP once）包括： |
1454 | |||||||||||
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NdeI |
CA`TA,TG |
240 |
ApaI |
G,GGCC`C | ||||||||
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SnaBI |
TAC|GTA |
346 |
PvuI |
CG,AT`CG |
1534 | |||||||
|
CspCI |
,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` |
380 |
BclI |
T`GATC,A |
1690 | |||||||
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NheI |
G`CTAG,C |
597 |
MfeI |
C`AATT,G |
1783 | |||||||
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2 / 4 YJ2707 pCMV-N-EGFP (綠色熒光蛋白) |
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400-1683301/800-8283301 |
上海一基/Beyotime | ||||||||
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G,CTAG`C |
597 |
HpaI |
GTT|AAC |
1796 | |
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Eco53kI |
GAG|CTC |
653 |
MluI |
A`CGCG,T |
1919 |
|
SacI |
G,AGCT`C |
651 |
BsaXI |
,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` |
2080 |
|
AfeI |
AGC|GCT |
660 |
DraIII |
CAC,NNN`GTG |
2146 |
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AgeI |
A`CCGG,T |
664 |
SfiI |
GGCCN,NNN`NGGCC |
2805 |
|
BcgI |
,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` |
765 |
StuI |
AGG|CCT |
2854 |
|
BsrGI |
T`GTAC,A |
1386 |
ClaI |
AT`CG,AT |
2873 |
|
BamHI |
G`GATC,C |
1394 |
BspDI |
AT`CG,AT |
2873 |
|
HindIII |
A`AGCT,T |
1400 |
EagI |
C`GGCC,G |
2939 |
|
PstI |
C,TGCA`G |
1406 |
KasI |
G`GCGC,C |
3032 |
|
EcoRI |
G`AATT,C |
1412 |
NarI |
GG`CG,CC |
3033 |
|
EcoRV |
GAT|ATC |
1420 |
SfoI |
GGC|GCC |
3034 |
|
SalI |
G`TCGA,C |
1424 |
PluTI |
G,GCGC`C |
3032 |
|
AccI |
GT`MK,AC |
1425 |
MscI |
TGG|CCA |
3115 |
|
BglII |
A`GATC,T |
1430 |
PflFI |
GACN`N,NGTC |
3151 |
|
BsoBI |
C`YCGR,G |
1436 |
Tth111I |
GACN`N,NGTC |
3151 |
|
PaeR7I |
C`TCGA,G |
1436 |
BsrDI |
GCAATG,NN` |
3264 |
|
AvaI |
C`YCGR,G |
1436 |
RsrII |
CG`GWC,CG |
3549 |
|
XhoI |
C`TCGA,G |
1436 |
BstBI |
TT`CG,AA |
3715 |
|
XbaI |
T`CTAG,A |
1442 |
BsaI |
GGTCTCN`NNNN, |
4022 |
|
SpeI |
A`CTAG,T |
1448 |
ApaLI |
G`TGCA,C |
4637 |
|
PspOMI |
G`GGCC,C |
1454 |
PciI |
A`CATG,T |
4951 |
pCMV-N-EGFP質(zhì)粒中推薦使用的測序引物序列如下：
N-EGFP primer (1284-1303): 5'-GCACCCAGTCCGCCCTGAGC-3'
T7 primer (1503-1524): 5'-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3'
- pCMV-N-EGFP的全序列信息請參考上海一基網(wǎng)站上該質(zhì)粒的信息。
- pCMV-N-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞后的表達效果請參考圖1。
圖1. pCMV-N-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞后的表達效果圖。左側(cè)為明場照片，右側(cè)為熒光照片。
包裝清單：
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產(chǎn)品編號 |
產(chǎn)品名稱 |
包裝 |
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YJ2707 |
pCMV-N-EGFP (綠色熒光蛋白) |
1μg |
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— |
說明書 |
1份 |
保存條件：
-20ºC保存。
注意事項：
- 本質(zhì)粒未經(jīng)上海一基書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。
- 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
- 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
- 首次使用時請先取少量本質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，進行質(zhì)粒小量、中量或大量抽提后再用于后續(xù)用途。抽提獲得的質(zhì)�？梢酝ㄟ^酶切電泳進行鑒定，或通過測序進行鑒定。
- pCMV-N-EGFP質(zhì)粒在其多克隆位點適當(dāng)酶切后可以插入待表達的目的基因，構(gòu)建的質(zhì)粒可以用常規(guī)方法轉(zhuǎn)染細胞。
