石蠟切片組織細(xì)胞色素C 免疫熒光檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明

石蠟切片組織細(xì)胞色素C 免疫熒光檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

YIJI 石蠟切片組織細(xì)胞色素 C 免疫熒光檢測(cè)試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)分離石蠟方法和抗細(xì)

胞色素C 單克隆抗體以及熒光染料綴合物二抗的應(yīng)用，在線粒體特異性熒光染料的幫助下，通過(guò)熒光顯微

鏡分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中細(xì)胞區(qū)室（線粒體和細(xì)胞漿）的細(xì)胞色素C 的分布狀態(tài)，從而觀察

分析細(xì)胞凋亡的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于

各種動(dòng)物和人體組織石蠟包埋切片的細(xì)胞色素C 分析。廣泛用于細(xì)胞生物學(xué)的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到

即用，反應(yīng)敏感，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，熒光清晰。

技術(shù)背景

細(xì)胞色素C（CYTOCHROME C）在細(xì)胞凋亡中扮演著重要作用。細(xì)胞色素C 位于線粒體內(nèi)外膜之間。當(dāng)

細(xì)胞凋亡時(shí)，它從線粒體內(nèi)釋放到細(xì)胞漿里，引起一系列的信號(hào)通道的下游反應(yīng)。通常使用免疫組化方法，

即通過(guò)不同波長(zhǎng)的熒光染料的重疊染色，檢測(cè)其分布，反映細(xì)胞凋亡和細(xì)胞通路等。

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI 去石蠟液（Reagent A） 毫升

YIJI 補(bǔ)水液A（Reagent B） 毫升

YIJI 補(bǔ)水液B（Reagent C） 毫升

YIJI 補(bǔ)水液C（Reagent D） 毫升

YIJI 補(bǔ)水液D（Reagent E） 毫升

YIJI 清理液（Reagent F） 毫升

YIJI 修復(fù)液（Reagent G） 毫升

YIJI 封阻液（Reagent H） 毫升

YIJI 抗體液（Reagent I） 毫升

YIJI 染色液（Reagent J） 毫升

YIJI 重染液（Reagent K） 微升

YIJI 抗淬滅液（Reagent L） 微升

YIJI 強(qiáng)化液（Reagent M） 毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1 份

保存方式

保存YIJI 修復(fù)液（Reagent G）、YIJI 封阻液（Reagent H）、YIJI 抗體液（Reagent I）、YIJI

染色液（Reagent J）、YIJI 重染液（Reagent K）和YIJI 抗淬滅液（Reagent L）在－20℃冰箱里，

其余的保存在 4℃冰箱里；YIJI 抗體液（Reagent I）和YIJI 染色液（Reagent J）嚴(yán)禁反復(fù)凍融；

YIJI 染色液（Reagent J）、YIJI 復(fù)染液（Reagent K）和YIJI 抗淬滅液（Reagent L）避免光

照；有效保證 6 月

1

用戶自備

1.5毫升離心管：用于配制重染工作液的容器

蓋玻片：用于封片孵育

小型染色缸：用于去石蠟的操作

烘箱：用于去石蠟處理

（共聚焦）熒光顯微鏡：用于組織細(xì)胞熒光觀察

實(shí)驗(yàn)步驟

一、 去石蠟處理

1． 取出 10 片待測(cè)的 10 微米厚的石蠟包埋的組織切片

2． 放進(jìn) 80℃烘箱，孵育 30 分鐘

3． 室溫下靜置 15 分鐘

4． 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育

染色缸 孵育時(shí)間

毫升YIJI 去石蠟液（Reagent A） 分鐘

毫升YIJI 去石蠟液（Reagent A） 分鐘

毫升YIJI 去石蠟液（Reagent A） 分鐘

毫升YIJI 補(bǔ)水液A（Reagent B） 分鐘

毫升YIJI 補(bǔ)水液B（Reagent C） 分鐘

毫升YIJI 補(bǔ)水液C（Reagent D） 分鐘

毫升YIJI 補(bǔ)水液D（Reagent E） 分鐘

5． 小心移去切片上的YIJI 補(bǔ)水液D（Reagent E）

6． 小心加上 微升YIJI 清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

7． 室溫下孵育5 分鐘

8． 小心移去切片上的YIJI 清理液（Reagent F）

二、樣品預(yù)處理

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里試劑盒中的試劑置入冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作：

9． （選擇步驟）將切片置于100 毫升燒杯，加入 毫升YIJI 強(qiáng)化液（Reagent M）

10．（選擇步驟）放進(jìn)微波爐里加熱5 分鐘：其中15 秒煮沸后，間隙15 秒后再煮沸，直至5 分鐘

11．（選擇步驟）室溫下，冷卻20 分鐘

12．加入 微升YIJI 修復(fù)液（Reagent G）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

2

13．室溫下孵育 5 分鐘

14．小心抽去YIJI 修復(fù)液（Reagent G）

15．空氣中晾干

16．加入 微升YIJI 清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

17．室溫下孵育5 分鐘

18．小心抽去YIJI 清理液（Reagent F）

19．加入 微升YIJI 封阻液（Reagent H）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

20．室溫下孵育60 分鐘

21．小心抽去YIJI 封阻液（Reagent H）

三、 樣品染色處理

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的YIJI 重染液（Reagent K）置入冰槽里融化，然后分別移

出 微升YIJI 清理液（Reagent F）和 微升YIJI 重染液（Reagent K）到新的

1.5 毫升離心管，標(biāo)記為YIJI 重染工作液，并放在暗室里備用。然后進(jìn)行下列操作。

22．加入 微升YIJI 抗體液（Reagent I）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

23．蓋上蓋玻片，室溫下孵育2 至16 小時(shí)（注意：避免氣泡；參見(jiàn)注意事項(xiàng) 8）

24．小心移去蓋玻片，抽去YIJI 抗體液（Reagent I）

25．加入 微升YIJI 清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

26．室溫下孵育5 分鐘

27．小心抽去YIJI 清理液（Reagent F）

28．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步25 至27 二次

29．加入 微升YIJI 染色液（Reagent J）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

30．室溫下孵育 30 分鐘，避免光照（注意：避免氣泡）

31．小心抽去YIJI 染色液（Reagent J）

32．加入 微升YIJI 清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

33．室溫下孵育5 分鐘

34．小心抽去YIJI 清理液（Reagent F）

35．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步32 至34 二次

36．加入 微升YIJI 重染工作液在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

37．室溫下孵育20 分鐘，避免光照

38．小心抽去YIJI 復(fù)染工作液

39．加入 微升YIJI 清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

40．室溫下孵育5 分鐘

41．小心抽去YIJI 清理液（Reagent F）

42．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步39 至41 二次

43．加入 微升YIJI 抗淬滅液（Reagent L）

44．蓋上蓋玻片或封片

45．即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下觀察

熒光染料 異硫氰酸熒光素（FITC） MitoTracker RED ――

熒光顏色 綠色 紅色 桔黃色

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