紅細胞裂解液（RBC Lysis Buffer,10×）使用說明書

紅細胞裂解液（RBC Lysis Buffer,10×）

簡介

在生物科研領域，經常需要去除紅細胞。去除紅細胞的方法有多種，如ACK Lysis Buffer、Tris-氯化銨紅細胞裂解液、Gey＇s Lysis Buffer。紅細胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer）是一種從人、鼠或其他哺乳動物等體內的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細胞的溶液，其主要有效成分為NH4CI。

RBC Lysis Buffer(10×)配方經過優(yōu)化不同于ACK Lysis Buffer，在裂解無核紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞（Lymphocyte）或其它有細胞核的細胞。對于裂解、去除有細胞核紅細胞，例如鳥或禽類的紅細胞，效果不佳，裂解類似細胞時，不建議采用。該裂解經過濾除菌，為10×的濃縮液，使用1×RBC Lysis Buffer處理過的血液或組織細胞樣品可以用于后續(xù)的細胞培養(yǎng)、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測，尤其適用于流式細胞檢測或需要高濃度裂解液的情況。

組成：

自備材料：

1. 胰蛋白酶
2. 離心機
3. PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液

操作步驟（僅供參考）：

注意：絕大多數情況下，應使用無菌去離子水稀釋RBC Lysis Buffer（10×）至1×使用，流式細胞術除外。

• 組織細胞樣本的常規(guī)操作

1. 制備細胞懸液：新鮮組織經過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當方法制備成細胞懸液，離心棄上清。
2. 裂解：加入3~5倍細胞沉淀體積的1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1~2min。

本操作步驟在4。C條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

1. 離心：4。C，400~500g離心5 min，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。
2. 如果發(fā)現紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3各一次。
3. 洗滌：根據實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4。C，400~500g離心2~3 min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應大于細胞沉淀體積的5倍以上。
4. 如有必要，重復上述步驟5一次，共洗滌1~2次。
5. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

• 組織細胞樣本的快速操作（無需洗滌）

1. 制備細胞懸液：新鮮組織經胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，制備細胞懸液，離心棄上清。
2. 裂解：加入細胞5倍細胞沉淀體積的1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1~2 min。本操作步驟在4。C條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3. 加入15~20 ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。
4. 離心：4。C，400~500g離心5 min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。
5. 如果發(fā)現紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2~3各一次。
6. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

• 血液樣本的常規(guī)操作

1. 取新鮮抗凝血，400~500 g離心5 min，棄上清。
2. 裂解：加入6~10倍細胞沉淀體積的1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1~5min。

本操作步驟在4。C條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對于鼠的血液，裂解1~2 min已經足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至4~5 min，并且裂解過程中輕輕搖動以促進紅細胞裂解。）

1. 離心：4。C，400~500g離心5 min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。
2. 如果發(fā)現紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3一次。
3. 洗滌：根據實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4。C，400~500g離心2~3 min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應大于細胞沉淀體積的5倍以上。
4. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

注意：對于微量或少量的血液樣本，可以不用第一步操作，可直接加入10倍血液體積的ACK Lysis Buffer進行第2步操作，并在4。C或室溫裂解4~15 min。對于鼠的血液，裂解4~5 min已經足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10 min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。

• 血液樣本的快速操作（無需洗滌）

1. 新鮮抗凝血中加入10倍體積的1×RBC Lysis Buffer，輕輕吹打混勻，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對于鼠的血液，裂解4~5 min已經足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10 min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。）
2. 加入20~30 ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。
3. 如果發(fā)現紅細胞裂解不完全，可以重復上述步驟2和步驟3一次。
4. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

注意事項：

1. 制備細胞懸液時應根據實驗需要，不一定要制備成單細胞懸液。
2. 后續(xù)試驗如果是用于細胞培養(yǎng)，操作過程中應注意無菌操作，盡量在超凈工作臺內操作。
3. 離心步驟盡量在4。C離心機上操作。
4. 常規(guī)步驟與快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心，可心節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。
5. 離心洗滌后，通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的檢測。
6. 如果經過1×RBC Lysis Buffer處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取，在處理細胞時不必使用DEPC處理的溶液，即無需在該操作中特意去除RNase。
7. 為了您的安全各健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12個月有效。                                                                      

如實驗中遇到相關技術問題，請及時咨詢公司技術人員