影響轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的因素簡(jiǎn)要介紹

影響轉(zhuǎn)染的因素很多，主要因素有以下幾個(gè)。

一、細(xì)胞狀態(tài)

在開(kāi)始轉(zhuǎn)染細(xì)胞之前，先制定一個(gè)適當(dāng)?shù)姆N板方案，使細(xì)胞密度從轉(zhuǎn)染開(kāi)始到結(jié)束都保持最佳狀態(tài)。一般低的細(xì)胞代數(shù)（<50）能確�；�因型不變。最適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過(guò)幾次傳代后達(dá)到指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，最容易轉(zhuǎn)染。

二、DNA質(zhì)量

DNA質(zhì)量對(duì)轉(zhuǎn)染效率影響非常大。一般的轉(zhuǎn)染技術(shù)，如脂質(zhì)體等，基于電荷吸引原理，如果DNA不純，帶少量的鹽離子、蛋白、代謝物污染都會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成和轉(zhuǎn)染的進(jìn)行。另外，對(duì)一些內(nèi)毒素敏感的細(xì)胞（如原代細(xì)胞，懸浮細(xì)胞和造血細(xì)胞），需要在質(zhì)粒抽提過(guò)程中有效去除脂多糖分子，保證理想的轉(zhuǎn)染效果。

 三、轉(zhuǎn)染方法

不同的細(xì)胞適用不同的轉(zhuǎn)染方法，如果實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建立了全套方法，摸出了最佳轉(zhuǎn)染條件，就照做。如果是新細(xì)胞系，最好查看其成功轉(zhuǎn)染案例�？蓞⒖嫁D(zhuǎn)染試劑提供的已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn)資料，如果你的細(xì)胞適用，可根據(jù)所選轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法照做。許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化DNA與轉(zhuǎn)染試劑比例，細(xì)胞數(shù)量，培養(yǎng)及檢測(cè)時(shí)間等。ViaFect轉(zhuǎn)染試劑是有創(chuàng)新型混合脂質(zhì)配方的新生代轉(zhuǎn)染試劑，可用于DNA轉(zhuǎn)染，高效低毒。無(wú)需去除血清，導(dǎo)入轉(zhuǎn)染試劑：DNA復(fù)合物后，無(wú)需洗滌或更換培養(yǎng)基，是目的基因在細(xì)胞中表達(dá)實(shí)驗(yàn)的推薦選擇。

ViaFect轉(zhuǎn)染試劑用于貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作步驟舉例 ：

1、在轉(zhuǎn)染前一天鋪細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞匯合度在75%左右。 

2、轉(zhuǎn)染當(dāng)天，將以無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA。再加入適量ViaFect 轉(zhuǎn)染試劑與DNA構(gòu)成適當(dāng)比例，孵育5-20min。 

3、加入適量轉(zhuǎn)染試劑:DNA混合物至細(xì)胞培養(yǎng)孔，輕柔混合。 

4、無(wú)需去除血清或更換培養(yǎng)條件。孵育24-48h或適當(dāng)時(shí)間，檢測(cè)結(jié)果。無(wú)需去除轉(zhuǎn)染混合物。 

5、檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 

四、轉(zhuǎn)染試劑

不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn)，通過(guò)這些資料選擇最適合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)染試劑。當(dāng)然，最適合的是高效、低毒、方便、廉價(jià)的轉(zhuǎn)染試劑。如ViaFect轉(zhuǎn)染試劑適用于多種類型的細(xì)胞系，成功轉(zhuǎn)染多種類型，包括貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞和干細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞，它在多種難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中轉(zhuǎn)染效率更高。另外 ViaFect轉(zhuǎn)染試劑毒性低，能夠在轉(zhuǎn)染過(guò)程中保持細(xì)胞的生物學(xué)和細(xì)胞代謝，從而更準(zhǔn)確的呈現(xiàn)細(xì)胞模型的生物學(xué)狀態(tài)。 而且ViaFect轉(zhuǎn)染試劑簡(jiǎn)單易用，并可進(jìn)行反向轉(zhuǎn)染(Reverse Transfection)，無(wú)需復(fù)雜優(yōu)化。 可以說(shuō)，同類轉(zhuǎn)染試劑中，ViaFect轉(zhuǎn)染試劑的性價(jià)比更高。 （注：反向轉(zhuǎn)染指先在培養(yǎng)板孔中加入DNA：轉(zhuǎn)染試劑混合物，再加入細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染的方式）

五、載體構(gòu)建

轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建（病毒載體，質(zhì)粒DNA，RNA，PCR產(chǎn)物，寡核苷酸等）也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。病毒載體對(duì)特定宿主細(xì)胞感染效率較高，但不同病毒載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細(xì)胞周期，如逆轉(zhuǎn)錄病毒需侵染分裂期的宿主細(xì)胞，此外還需考慮一些安全問(wèn)題（如基因污染）。除載體構(gòu)建外，載體的形態(tài)及大小對(duì)轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響。如果基因產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞有毒性作用，轉(zhuǎn)染也很難進(jìn)行，因此選擇組成或可調(diào)控，強(qiáng)度合適的啟動(dòng)子也很重要，同時(shí)做空載體及其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對(duì)照可排除毒性影響的干擾。