免疫組化抗原修復(fù)注意事項
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經(jīng)甲醛固定的部分組織細(xì)胞，因固定過程中可能會形成醛鍵或羧甲基而封閉部分抗原決定簇，使免疫組化標(biāo)記敏感性明顯降低，因此在染色前，有些抗原需進(jìn)行修復(fù)或暴露。 抗原修復(fù)方法可分為化學(xué)方法和物理方法�；瘜W(xué)方法是以酶消化方法，常用胰蛋白酶及胃蛋白酶，配制濃度與消化時間要適度。常用的物理方法有單純加熱、微波處理和高壓加熱。在選用這三種方法時，浸泡切片的緩沖液的離子強度和pH、加熱的溫度和時間均影響著抗原修復(fù)效果。 | |||||||||||||||
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抗原修復(fù)液的pH非常重要，有效的抗原修復(fù)pH要比修復(fù)液的化學(xué)成分更重要，同樣的修復(fù)液隨著pH的升高染色的強度逐漸增強，但最佳pH范圍為6.0-10.0。目前大家公認(rèn)的最好的抗原修復(fù)液是pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液和pH8.0的EDTA緩沖液。作為通用修復(fù)液堿性pH的修復(fù)液要比酸性的有效，而對固定很長時間舊的存檔組織，酸性pH的修復(fù)液則優(yōu)于堿性的修復(fù)液。 | |||||||||||||||
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70-90℃的溫度對未經(jīng)固定的蛋白質(zhì)可發(fā)生變性，但經(jīng)福爾馬林固定的蛋白質(zhì)，溫度必須達(dá)到92℃以上方能使其變性。研究結(jié)果顯示，溫度為92-98℃是合適的，95℃效果最好。 | |||||||||||||||
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抗原修復(fù)持續(xù)時間過后，取出放于室溫中讓其慢慢地降溫，絕對不能為了爭取時間，強行用冰塊或冷水使其降溫。這是因為當(dāng)高溫中的抗原蛋白分子鏈脫離了其他的束縛或聯(lián)結(jié)，要有一個自然環(huán)境讓其自然放松下來，隨著溫度的降低，它們會慢慢地恢復(fù)原來的形態(tài)和構(gòu)型。 | |||||||||||||||
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應(yīng)用于抗原修復(fù)的液體，一定要充足，防止切片干涸。應(yīng)用大量的抗原修復(fù)液時，由于它的量較大，可延緩液體的沸騰時間，增加切片受微波輻射的量，對抗原修復(fù)將達(dá)到徹底。 抗原修復(fù)必備品：
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