銳賽小課堂：關(guān)于IHC檢驗的分析驗證原則的指南推薦

日前，美國 CAP2014 年會上，美國病理家學(xué)會及實驗室質(zhì)量中心發(fā)布了一項關(guān)于 IHC 檢驗的分析驗證原則的指南推薦（Principles of Analytic Validation of Immunohistochemical Assays），原文發(fā)表于近期 Arch Pathol Lab Med 雜志，摘錄如下：

 

指南聲明

 

1、推薦：實驗室必須確認(rèn)驗證所有的免疫組化（IHC）試驗結(jié)果后才能用于臨床。

注：這些手段包括（但不限于）：

將新的檢驗結(jié)果與形態(tài)學(xué)和預(yù)期結(jié)果相比較；

將新的檢驗結(jié)果與同一實驗室同一樣本的前次檢驗結(jié)果進行比較（使用已經(jīng)驗證的檢驗方案）；

將新的檢驗結(jié)果與同一組織樣本在另一實驗室得出的結(jié)果進行比較（均使用已經(jīng)驗證的檢驗方案）；

將新的檢驗結(jié)果與先前已得到驗證的非免疫組化檢驗結(jié)果相比較。

 

2、推薦：對于臨床應(yīng)用的每一種已經(jīng)初步驗證的檢驗方案（除 HER2/neu，ER 和 PgR 之外，它們已存在明確的驗證指南），新檢驗和前次檢驗或預(yù)期的實驗室結(jié)果必須達到至少 90% 的整體一致性。如果一致性小于 90%，實驗室需要探討一致性低的原因。

 

3、專家共識：對于非預(yù)測性因子檢驗方案的初步分析驗證，實驗室應(yīng)至少檢驗 10 例陽性和 10 例陰性組織樣本。若實驗室主任醫(yī)師認(rèn)為對于某些特定標(biāo)志物（如，罕見的抗原），少于 20 例驗證樣本已足夠，則需記錄該項決策的理由。

 

注：若存在陽性樣本時，驗證應(yīng)包括高水平和低水平表達的因子，并且對于需定量報告的標(biāo)志物，應(yīng)擴大臨床結(jié)果（表達水平）的預(yù)期范圍。

 

4、專家共識：對于所有實驗室預(yù)測標(biāo)志物檢驗方案（HER2/neu，ER 和 PgR 除外）的初步分析驗證而言，實驗室應(yīng)至少檢驗 20 例陽性和 20 例陰性組織樣本。若實驗室主任醫(yī)師認(rèn)為對于某一特定的標(biāo)志物驗證樣本可少于 40 例，則需記錄決策理由。

 

注：經(jīng)驗證的陽性樣本數(shù)量應(yīng)大于臨床結(jié)果（表達水平）的預(yù)期范圍。該項推薦不適用于已存在單獨驗證指南的任意一種標(biāo)志物。

 

5、推薦：對于兼有預(yù)測性和非預(yù)測性雙重特性的標(biāo)志物，應(yīng)將其作為預(yù)測性標(biāo)志物加以實驗室驗證。

 

6、推薦：如果可能，實驗室驗證使用的組織標(biāo)本的固定和處理方法應(yīng)與此后用于臨床檢驗的標(biāo)本相同。

 

7、專家共識：對于處理方式不同于已經(jīng)驗證的方案中的組織處理方式（如，乙醇固定的細(xì)胞塊，空氣干燥涂片標(biāo)本，福爾馬林固定）的細(xì)胞學(xué)樣本進行常規(guī) IHC 檢驗時，實驗室應(yīng)檢測足夠數(shù)量的標(biāo)本以確保檢驗達到預(yù)期目標(biāo)。實驗室主任負(fù)責(zé)確定需檢測的陽性和陰性樣本數(shù)，以及需檢驗的預(yù)測性和非預(yù)測性標(biāo)志物的數(shù)量。

 

8、專家意見：對于脫鈣組織樣本進行常規(guī) IHC 檢測時，實驗室應(yīng)檢測足夠數(shù)量的上述樣本以確保達到預(yù)期結(jié)果。實驗室醫(yī)學(xué)主任負(fù)責(zé)確定陽性和陰性組織的數(shù)目以及需檢驗的預(yù)測性和非預(yù)測性標(biāo)志物的數(shù)目。

 

9、推薦：實驗室可使用整個切片，TMAs 和 / 或 MTBs 用于驗證。如果 TMAs/MTBs 不適合用于靶標(biāo)抗原或如果實驗室醫(yī)學(xué)主任不能確定 TMAs/MTBs 的固定和處理是否與臨床樣本相似，則需對整個切片剖面進行檢驗。

 

10、專家意見：當(dāng)新的試劑批次用于臨床已經(jīng)驗證的檢驗方案時，實驗室應(yīng)使用至少一例已知陽性樣本和一例已知陰性樣本對新試劑進行性能檢驗。

 

11、專家意見：當(dāng)已經(jīng)驗證的檢驗方案出現(xiàn)如下任意一種變化時，實驗室應(yīng)利用至少 2 例已知陽性樣本和 2 例已知陰性樣本對檢驗方案進行性能確認(rèn)。

變化方式如下：

抗體稀釋；

抗體供應(yīng)商變化（相同的克�。�；

孵化或修復(fù)時間變化（相同的方法）。

 

12、專家意見：實驗室應(yīng)檢驗足夠數(shù)目的樣本來確認(rèn)檢驗方案的性能，以確保當(dāng)出現(xiàn)如下情形時仍能始終如一地達到預(yù)期效果：

固定方式；

抗原修復(fù)方法（例如，pH 值的變化，不同的緩沖液，不同的加熱平臺）；

抗原檢測系統(tǒng)；

組織處理或檢驗設(shè)備；

檢驗的環(huán)境條件（如，實驗室搬遷）；

實驗室供水。

實驗室醫(yī)學(xué)主任負(fù)責(zé)決定需檢測的預(yù)測性標(biāo)志物和非預(yù)測性標(biāo)志物的數(shù)目，以及需檢測的陽性組織標(biāo)本和陰性組織標(biāo)本數(shù)目。

 

13、專家意見：當(dāng)抗體克隆或已有檢驗方案變化時，實驗室需進行一項完整的重新驗證（等同于初次分析驗證）過程。

 

14、專家意見：實驗室必須記錄所有符合監(jiān)管和認(rèn)證要求的確認(rèn)、驗證和校正過程。