正常大鼠小膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)

                                  正常大鼠小膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)               

實驗材料：
1. 新生大鼠或小鼠；
2. 不含Ca²⁺和Mg²⁺的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素，pH7.2；
3. 培養(yǎng)用液：含10%的胎牛血清的MEM培養(yǎng)液，補加5μg/ml牛胰島素、2%葡萄糖及抗生素；
4. CFS-Ⅰ刺激因子：小膠質(zhì)細胞在體外培養(yǎng)條件下一般不分裂，加入星形膠質(zhì)細胞所產(chǎn)生的活性物質(zhì)或單核巨噬細胞系體外存活、增值和分化特異的某些生長因子如CFS后可在體外增值；
5. 培養(yǎng)器具：眼科剪、眼科鑷等；

實驗方法：
1. 切取新生大鼠大腦皮質(zhì)等灰質(zhì)組織，經(jīng)剪碎、胰蛋白酶消化，制成分離的細胞懸液，培養(yǎng)瓶中進行原代培養(yǎng)兩周左右。制備混合的膠質(zhì)細胞原代培養(yǎng)物；
2. 37℃恒溫搖床上以150r/min搖動處理膠質(zhì)細胞原代培養(yǎng)物2h；
3. 收集培養(yǎng)瓶中搖晃下來的細胞懸液，將其種植到未用生長基質(zhì)成分包被的塑料培養(yǎng)皿內(nèi)進行短期培養(yǎng)；
4. 棄去未貼壁的漂浮細胞及懸液。已在培養(yǎng)皿上貼壁的細胞即為小膠質(zhì)細胞；
5. 將所獲得的小膠質(zhì)細胞調(diào)制成細胞密度為2×105個/ml的細胞懸液；
6. 將細胞懸液種植到培養(yǎng)瓶、皿內(nèi)，繼續(xù)培養(yǎng)。屆時在培養(yǎng)液中加入10%粗制CFS或者25U/ml的純CFS。一周換液兩次；